您好,欢迎来到划驼旅游。
搜索
您的当前位置:首页鼠尾提取DNA方法

鼠尾提取DNA方法

来源:划驼旅游


转基因小鼠筛选——鼠尾提取基因组DNA方法

1.小鼠分笼后打耳标,剪取小鼠尾尖3mm--5mm左右于1.5mL离心管中,标记耳标号。

2.配置消化液,每管加入消化液0.5mL,55℃,3-5h,或放置过夜。(最长可放置3天)。

3.加1倍体积(0.5mL)PCI(下层液体),上下颠倒10余次。(PCI可分装出一些现用,以免操作不慎污染)。

4.室温15000rpm离心,10min。

5.小心取上清约0.4mL入新管,依次标号,加入异丙醇0.4mL,上下倒转10次左右。

6.4℃,15000rpm离心,5min。

7.弃上清,滤纸吸干,加入70%乙醇0.5mL,将管底沉淀弹起,上下颠倒几次,洗涤。

8.4℃,15000rpm离心,5--7min。

9.弃上清,瞬时离心,用吸干剩余液体,后经空气干燥5-10min。 10.加入1*TE 60-170μL一般加100μL,振荡30min溶解,于4℃冰箱保存。 注意事项:

1.小鼠耳标与管号一一对应,在剪尾或提取DNA过程中如发生混淆,则应重新剪尾。

2.配置消化液时,最后加蛋白酶K,配置完成后混合均匀再分装;分装后依次检查,确认每管的鼠尾都浸入在消化液中。尽量多配一些消化液,以免不够。

1 / 4

3.提取DNA之前,先检查鼠尾消化情况,过夜消化后,一般只能观察到少量骨骼及鼠尾毛发,如观察到鼠尾组织,说明消化不完全,可能是时间不够或消化液配置不正确。

4.由于实验中用到的PCI,异丙醇等对身体有害,因此在提取DNA和配置PCI时,应注意防护,戴好口罩和乳胶手套。

5.实验过程中,应轻拿轻放,避免液体洒出,沾湿手套,洗去Marker笔字迹等情况的发生。为了防止耳标号被擦掉,最好连号摆放。

6.吸取上清一步中,应保证上清质量,避免下层杂质的吸入,如不慎吸入,应将样品重新离心。

7.DNA沉淀一般呈白色或半透明胶状,混有杂质时可能带有黑色,提取过程中如观察不到沉淀,应做好标记,重新剪尾。

8.DNA样品保存于4℃冰箱,保存时应标明剪尾日期,小鼠品系等各项资料,以便查找。

9.使用离心机时,离心管尽量分散放。

10.吸取挥发有腐蚀性液体时,应用带过滤装置的头,以免腐蚀。(如酚﹑强酸﹑强碱等。)

11.各管之间应隔开放,以免加液时混淆。

12.固定一把专用于吸取腐蚀性液体,如酚等。消化液配方1管 20*SSC 0.5M EDTA 10% SDS MQ H 2025μL 1μL

2 / 4

50μL 415μL4管 0.1 mL 4μL 40μL 0.2 mL 20μL10管 10μL 0.1 mL 0.5 mL 50μL20管 20μL 0.2 mL 1.0 mL 100μL40管1 mL 40μL 0.4 mL 2.0 mL 200μL60管1.5 mL

3 / 4

60μL 0.6 mL 3.0 mL

300μL80管2 mL80μL 0.8 mL 4.0 mL400μL 0.25 mL0.5 mL 1M Tris-Hcl10μL

1.66 mL4.15 mL8.3 mL16.6 mL25.8 mL33.2 mLProteinaseK5μL PCI配方:Tris-

TE配方:Tris-Hcl 0.25饱和酚:三氯甲烷:异戊醇=25:24:mL0.5M EDTA 0.05mL加MQ H 20至25mL

4 / 4

1

因篇幅问题不能全部显示,请点此查看更多更全内容

Copyright © 2019- huatuo6.com 版权所有 湘ICP备2023023988号-11

违法及侵权请联系:TEL:199 1889 7713 E-MAIL:2724546146@qq.com

本站由北京市万商天勤律师事务所王兴未律师提供法律服务