厌氧氨氧化菌的特性与分类

浙江大学学报（农业与生命科学版）　３５（５）：４７３～４８１，２００９　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．）　文章编号：１００８—９２０９（２００９）０５—０４７３　０９　ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２００９．０５．００１　厌氧氨氧化菌的特性与分类　郑平，张蕾　（浙江大学环境与资源学院环境与工程系，浙江杭州３１００２９）　摘要：厌氧氨氧化是环境领域和微生物领域的一个重大发现，对于认识氮素生物地球化学循环、丰富　微生物学理论和开发新型生物脱氮工艺均具有巨大的推动作用．近年来对厌氧氨氧化茵的研究取得了　许多突破性成果，探明了个体形态特征、细胞化学组分特征、富集培养与分离特征、生理生化特征以及生　态学特征，提出了厌氧氨氧化代谢模型，纯化研究了多种厌氧氨氧化酶，分离获得和分类鉴定了５属９　种厌氧氨氧化菌，建立了厌氧氨氧化茵科（Ａｎａｍｍｏｘａｃｅａｅ）．本文系统介绍了厌氧氨氧化菌的特性，详细　描述了９种已被鉴定的厌氧氨氧化茵．　关键词：厌氧氨氧化茵　形态；生理；生化；种类　文献标志码：Ａ　中图分类号：Ｑ　９３９．９；Ｘ　５３　ＺＨＥＮＧ　Ｐｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００２９，Ｃｈｉｎａ）　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ（ａｎａｍｍｏｘ）ｂａｃｔｅｒｉａ．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．），２００９，３５（５）：４７３—４８１　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ（ａｎａｍｍｏｘ）ｉＳ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　ｍｉｃｒ０ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｉｅｌｄｓ．　Ｉｔ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ　ｂｉｏｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｃｙｃｌｅ　ｉｎ　ｎａｔｕｒｅ，　ｅｘｔｅｎｄｓ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｕｒｇｅｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，　ｐｌｅｎｔｙ　ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｍａｄｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅｉｒ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｉｎ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｃｏｌｏｇｙ　ｗｅｒｅ　ｒｅｖｅａｌｅｄ，ａｎｄ　ｐｒｏｂａｂｌｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｏｐｏｓｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ．Ａ　ｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　Ａｎａｍｍｏｘａｃｅａｅ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｆｉｖｅ　ｇｅｎｕｓ，ｎｉｎｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｉｓ　ａ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｖｉｅｗ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｉｎｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ；ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｓｐｅｃｉｅｓ　在厌氧条件下，以亚盐作为氧化剂将氨　氧化成氮气的生物反应称为厌氧氨氧化　．１９９５　年，由荷兰Ｍｕｌｄｅｒ等　首先在一个处理酵母废　水的反硝化中试装置内发现该反应过程．此后，　检测出厌氧氨氧化反应，并认为它在氮素生物地　球化学循环中起着举足轻重的作用．据估计，其　氮气产量占海洋氮气释放量的３Ｏ　～５ｏ％　．　在环境工程上，厌氧氨氧化反应已成功地应用于　废水生物脱氮处理．据报道，在荷兰鹿特丹污水　人们陆续在海洋、河流、湖泊底泥等自然环境中　收稿日期：２００８—０８—１２　基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０７７００３９）　国家高技术研究发展计划“８６３”资助项目（２００６ＡＡ０６Ｚ３３２）　作者简介：郑平（１９６２），男，浙江金华人，教授　从事废物生物处理研究Ｔｅｌ：０５７１—８６９７１　７０９；Ｅ—ｍａｉｌ：ｐｚｈｅｎｇ＠ｚｊｕ　ｅｄｕ．ｅｆｔ．　浙江文学学报（农业与生命科学版）　第３　５卷　处理厂，利用厌氧氨氧化工艺对污泥压滤液进行　脱氮处理，反应器总氮去除率高达９．５　ｋｇ．ｍ　．　ｄ　［５］，显示了诱人的应用前景．厌氧氨氧化的推　动者一一厌氧氨氧化菌是一群分支很深的浮霉　状菌，其特殊的细胞结构、代谢方式和进化地位　引起了生物学家的高度关注．本文拟就厌氧氨氧　化菌的研究进展作一综述．　１　厌氧氨氧化菌的特性　１．１个体形态特征　厌氧氨氧化菌形态多样，呈球形、卵形等，　直径０．８～１．１　ｍ＿６］．厌氧氨氧化菌是革兰氏　阴性菌．细胞外无荚膜．细胞壁表面有火山口状　结构［７］，少数有菌毛ｌ６　．细胞内分隔成３部分：　厌氧氨氧化体（ａｎａｍｍｏｘｏｓｏｍｅ）、核糖细胞质　（ｒｉｈｏｐｌａｓｍ）及外室细胞质（ｐａｒｙｐｈｏｐｌａｓｍ）．核　糖细胞质中含有核糖体和拟核，大部分ＤＮＡ　存在于此Ｌ８ｊ．该菌出芽生殖．　厌氧氨氧化体是厌氧氨氧化菌所特有的结　构，占细胞体积的５０　～８０　，厌氧氨氧化反　应在其内进行　］．厌氧氨氧化体由双层膜包围，　该膜深深陷入厌氧氨氧化体内部　（图１）．厌　氧氨氧化体不含核糖体，但含六角形的管状结　构和电子密集颗粒．透射电镜及能谱仪分析表　ＣＷ：细胞壁；ｃｍ：细胞膜；ｐａ：外室细胞质；ｉｃｍ：胞　质内膜；ｒｉ：核糖细胞质；ａｍ：厌氧氨氧化体膜；ａ：厌氧氨　氧化体．长箭头：管状结构；短箭头：电子密集颗粒　图１厌氧氨氧化菌细胞的超微结构图　Ｆｉｇ．１　Ｕ【ｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　０ｆ　ＢＰ￣ａｌＴＩＴＤ，ＯＸ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｅｌｌ　明，这些电子密集颗粒中含有铁元素。。ｊ．　１．２细胞壁和细胞膜化学组分特征　厌氧氨氧化菌的细胞壁主要由蛋白质组成，　不含肽聚糖．细胞膜中含有特殊的阶梯烷膜脂，　由多个环丁烷组合而成，形状类似阶梯＿１　．在各　种厌氧氨氧化菌中，阶梯烷膜脂的含量基本相　似．疏水的阶梯烷膜脂与亲水的胆碱磷酸、乙醇　胺磷酸或甘油磷酸结合形成磷脂，构成细胞膜的　骨架．细胞膜中的非阶梯烷膜脂由直链脂肪酸、　支链脂肪酸、单饱和脂肪酸和三萜系化合物组　成．三萜系化合物包括Ｃ２　的藿烷类化合物　（ｈｏｐａｎｏｉｄ），细菌藿四醇（ｂａｃｔｅｒｉｏｈｏｐａｎｅｔｅｔｒｏｌ，　ＢＨＴ）和鲨烯（ｓｑｕａｌｅｎｅ，Ｃ３ｏ　Ｈ５。）．其中，ＢＨＴ首　次发现于严格厌氧菌中　．在不同厌氧氨氧化　菌种中，非阶梯烷膜脂的种类和含量变化较　大＿１　．曾一度认为阶梯烷膜脂只存在于厌氧氨　氧化体的双层膜上，其功能是有毒中间产物　的扩散．目前认为阶梯烷膜脂存在于厌氧氨氧化　菌的所有膜结构上（包括细胞质膜），它们与非阶　梯烷膜脂相结合，以确保其他膜结构的穿透性好　于厌氧氨氧化体膜＿１　］．　１．３富集培养与分离特征　厌氧氨氧化菌的富集培养选用自然样品作　为接种物（如活性污泥、海洋底泥、土壤），按目　标菌群所需的最佳生境条件，以含有适量基质　和营养元素的培养液（表１）在生物反应器中进　行［７］．厌氧氨氧化菌生长缓慢，倍增时问１０～　３０　ｄ［８］．富集培养物呈红色，性状粘稠，含有较　多的胞外多聚物ｌｌ　．　厌氧氨氧化菌是一种难培养的微生物，采　用系列稀释分离、平板划线分离、显微单细胞分　离等传统微生物分离方法，均未分离成功．迄今　为止，密度梯度离心法是成功分离厌氧氨氧化　菌的唯一方法．其原理是通过离心使不同密度　的细菌细胞形成不同的沉降带［１　．具体操作方　法如下：首先，用超声波温和破碎厌氧氨氧化菌　富集培养物，将菌群分散成单个细胞；接着，离　心去除残留的聚集体（生物膜或絮体碎片）；最　后，将分散的细胞用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心，使　厌氧氨氧化菌在离心管内形成一条深红色条　带．采用该方法可获得高纯度的细胞悬液，每　２００　８００个细胞中可只含有１个污染细胞Ｌ１　．　第５期　郑平，张蕾，等：厌氧氨氧化菌的特性与分类　表１　富集厌氧氨氧化菌的营养元素组成　Ｔａｂｌｅ　１　Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　营养物　质量浓度／（ｇ．Ｉ　）　ＫＨ２ＰＯ４　ＣａＣ１，　ＭｇＳＯ４　７Ｈ２（）　ＫＨＣ０３　微量元素溶液Ｉ　ＥＤＴＡ　ＦｅＳＯ４　微量元素溶液ＩＩ　ＥＤＴＡ　Ｈ　３ＢＯ４　ＭｎＣｌ２　４Ｈ　ｚ（）　ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ　ＺｎＳＯ４．７Ｈ２（）　ＮｉＣＩ２．６Ｈ２ｏ　ＮａＭｏＯ４．２Ｈ　２Ｏ　ＮａＳｅＯ４　１ＯＨ２Ｏ　１．４生理生化特征　厌氧氨氧化菌为化能自养型细菌　］，以二　氧化碳作为唯一碳源，通过将亚氧化成硝　酸来获得能量，并通过乙酰一ＣｏＡ途径同化二氧　化碳口　．虽然有的厌氧氨氧化菌能够转化丙　酸、乙酸等有机物质，但它们不能将其用作碳　源＿１　。　．厌氧氨氧化菌对氧敏感，只能在氧分　压低于５　氧饱和（以空气中的氧浓度为　１００　，ｏ４）的条件下生存，一旦氧分压超过１８　氧　饱和，其活性即受抑制，但该抑制是可逆　的＿】　．厌氧氨氧化菌的最佳生长ｐＨ范围为　６．７～８．３，最佳生长温度范围为２０～４３℃¨７］．　厌氧氨氧化菌对氨和亚的亲和力常数都低　于ｌ×１０　ｇ　Ｎ．Ｉ　＿］９］．基质浓度过高会抑制　厌氧氨氧化菌活性ｌｌ　（表２）．　表２基质对厌氧氨氧化菌的抑制浓度　Ｔａｂｌｅ　２　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｏｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｍｍｏ１．Ｌ　注：半抑制浓度代表抑制５０　厌氧氨氧化活性的基质　浓度　１９９７年，ｖａｎ　ｄｅ　Ｇｒａｆｔ等　。　基于　Ｎ示踪　研究，提出了厌氧氨氧化菌代谢模型（图２）；基　于厌氧氨氧化菌基因组学和酶学研究，其他研　究者＿２　对此代谢模型作了修正（图３）．２种模　型的最大区别在于：前者认为亚的还原产　物是羟氨（ＮＨ　ＯＨ），后者则认为亚的还　原产物是Ｎｏ．根据改进的模型，亚先被含　有细胞色素ｃ（Ｃｙｔ　Ｃ）和细胞色素ｄ１的亚　还原酶（ＮｉＲ）还原成一氧化氮（ＮＯ。一＋ｅ—　ＮＯ）；再由联氨水解酶（ＨＨ）将一氧化氮与氨　结合成联氨（ＮＯ＋ＮＨ　＋３ｅ一一Ｎ　Ｈ　）；最　后由联氨氧化酶（ＨＺＯ）或羟氨氧化还原酶　（ＨＡＯ）将联氨氧化成氮气（Ｎ：Ｈ　一Ｎ　＋　４ｅ）．在联氨氧化成氮气的过程中，可产生４　个电子，这４个电子通过细胞色素Ｃ、泛醌、细　胞色素ｂｃｌ复合体以及其他细胞色素Ｃ传递给　ＮｉＲ和ＨＨ，其中３个电子传递给ＮｉＲ，１个电　子传递给ＨＨ．伴随电子传递，质子被排放至厌　氧氨氧化体膜外侧，在该膜两侧形成质子梯度，　驱动ＡＴＰ合成［２３　２８］．　Ｎ０２　图２基于”Ｎ示踪研究的代谢途径　Ｆｉｇ　２　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　。Ｎ　ｓｔｕｄｙ　ＨＡｏ和ＨＺＯ是厌氧氨氧化菌中研究的　较为深入的２种酶．ＨＡＯ广泛存在于好氧氨　氧化细菌、反硝化细菌等微生物中，它不但能够　催化羟氨氧化成亚，也能够将亚还原　为羟氨，还能催化氧化联氨¨１］．从厌氧氨氧化菌　中分离获得的ＨＡ０不同于从好氧氨氧化细菌　中获得的ＨＡＯ，它不能将羟氨转化成亚，　只能将其转化成ＮＯ或Ｎ。Ｏ．已被纯化的　ＨＡｏ有２种，虽然两者的分子量和亚单位不　同，但是均含大量Ｃ型血红素［１６个和（２６土４）　个］和Ｐ　细胞色素．该酶也能催化氧化联氨，　浙江大学学报（农业与生命科学版）　第３　５卷　但对羟氨的亲和力更强　＇。　（表３）．ＨＺＯ也已　联氨，不能催化氧化羟氨．但羟氨能与该酶结　从厌氧氨氧化菌中分离纯化，它只能催化氧化　合，从而对联氨产生竞争性抑制　．　ｃｅｌ１　ｗａｌｌ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐａｒｙｐｈｏｐｌａｓｍ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｒｉｂｏｐｌａｓｍ　ｎｕｃｌｅｏｉｄ　图３基于基因组学和酶学的代谢途径　Ｆｉｇ．３　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ａｎｄ　ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　表３厌氧氨氧化菌ＨＡＯ和ＨＺＯ酶的特性　Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ＨＡＯ　ａｎｄ　ＨＺＯ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　注：ａ以ＰＢＳ和ＭＴＴ为电子受体；　以细胞色素Ｃ为电子受体；ＮＤ：未检出；ＮＲ：未报道　１．５生态学特征　氧氨氧化球菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　目前发现的厌氧氨氧化菌有５个属，９个　ｓｕｌｆａｔｅ）”分离自污水处理厂构筑物或实验室反　种ｌＬ１　（图４）．“待定厌氧氨氧化布罗卡地菌　应器内［１　’２９　３４；；“待定黑海阶梯烷菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｅａｄｉａ　ａｎａｍｍｏｘｉｄａｎｓ）”，“待定荧　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｓｏｒｏｋｉｎｉｉ）”分离白海水中　．检测表　光布罗卡地菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　ｆｕｌｇｉｄａ）”，　明，厌氧氨氧化菌也存在于海岸、浅滩、人河口的　“待定斯图加特库氏菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ　底泥中．厌氧氨氧化菌的分布极其广泛＿３　。　．　ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉｓ）”，“待定布罗达氏阶梯烷菌　由于厌氧氨氧化同时需要氨和亚２种　（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ）”，“待定韦格氏阶　基质，在实验室反应器中或在污水厂构筑物中，　梯烷菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ）”，“待定　当溶解氧浓度较低时，厌氧氨氧化菌可与好氧　亚洲杰特氏菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｊｅｔｔｅｎｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ）”，　氨氧化菌共同存在，互惠互利．好氧氨氧化菌产　“待定丙酸厌氧氨氧化球菌（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　生的亚用作厌氧氨氧化菌的基质，而厌氧　Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ）”，“待定硫酸盐厌　氨氧化菌消耗亚，则可解除亚对好氧　第５期　郑平，张蕾，等：厌氧氨氧化菌的特性与分类　氨氧化菌的抑制Ｄｇ］．　（ＰＣＲ）、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）、克隆测序　对厌氧氨氧化菌的生态学研究主要依赖分　和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）．在厌氧氨氧化菌生态　子生物学手段，其中包括聚合酶链式反应　学研究中常用的ＰＣＲ引物ｍ，　’们。　列于表４．　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ‘Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ’　图４厌氧氨氧化菌的系统发育树　Ｆｉｇ．４　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　表４研究厌氧氨氧化菌生态学常用的ＰＣＲ引物　Ｔａｂｌｅ　４　ＰＣＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｕａｌｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　目标菌群　上游引物名称　上游引物序列　下游引物名称　下游引物序列　厂，名字中的“Ｂｒｏｃａｄｉａ”、“ａｎａｍｍｏｘｉｄａｎｓ”分别　２　厌氧氨氧化菌的分类　指发现地和代谢方式　．它是第一个被富集鉴　定的厌氧氨氧化菌种，也是“Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　浮霉状菌目（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ）是细菌域中　分化较早的一个分支．该目包括２个科，９个属，　分别为Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｓ，Ｐｉｒｅｌｌｕｌａ，Ｇｅｍｍａｔａ，　Ｉｓｏｓｐｈａｅｒａ，Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ，Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ，　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ，　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｊｅｔｔｅｎｉａ，Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ．其中，前　４个属归入浮霉状菌科（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ），皆　为化能异养型好氧菌，后５个属归入厌氧氨氧化　菌科（Ａｎａｍｍｏｘａｃｅａｅ），皆为化能自养型厌氧菌，　图５　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　ａｎａｍｍｏｘｉｄａｎｓ茵落的电　并具有厌氧氨氧化功能＿４　“］．　子显微镜照片　２．１　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　ａｎａｍｍｏｘｉｄａｎｓ　Ｆｉｇ．５　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｇｒａｐｈ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　该种发现于荷兰Ｇｉｓｔ—Ｂｒｏｃａｄｅｓ污水处理　ａｎａｍｒｎｏｘｉｄａｎｓ　ｃｏｌｏｎｉｅｓ　浙江大学学报（农业与生命科学版）　第３　５卷　Ｂｒｏｃａｄｉａ”属的代表种．菌体呈球形，具有前述　厌氧氨氧化菌的细胞结构特征，如细胞表面有　火山口状结构，内含厌氧氨氧化体，无荚膜，无　鞭毛和菌毛［７　（图５）．细胞膜含阶梯烷膜脂，约　占细胞总脂类的３４Ｕｏｌ　．以亚为能源，以　１二氧化碳为碳源，不能利用小分子有机酸类，如　“ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉＳ，，是该菌的发现地＿３　．该菌呈球　状，直径１肚ｍ左右（图６）．化能自养型　不能利　用甲酸、丙酸等有机酸．菌体具有前述厌氧氨氧　化菌的细胞结构特征．在细胞中，阶梯烷膜脂占　细胞总脂类的４５　［１　．已从该菌体内分离获得　ＨＡＯ和ＨＺ０，前者能同时氧化羟氨和联氨，后　者只能氧化联氨．该菌在ＧｅｎＢａｎｋ中的注册号　甲酸、丙酸等．倍增时间１１　ｄ，最佳生长ｐＨ　８，　最佳生长温度４Ｏ℃　＇删．已从该菌体内分离获　得分子量为（１８３±１２）ｋｕ的ＨＡＯ，并证明它　能同时氧化羟氨和联氨　．它在ＧｅｎＢａｎｋ中　的注册号为ＡＦ３７５９９４．　２．２　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　ｆｕｌｇｉｄａ　该种发现于荷兰鹿特丹污水处理厂，名字　中的“ｆｕｌｇｉｄａ”来源于英语中“ｆｕｌｇｉｄ”一词，意为　“灿烂的，闪耀的”，因这种细菌形成的胞外多聚　物能够发光而命名ｌ＿３　．细胞呈球形，直径　０．７４１　ｔａｍ．该菌为化能自养型厌氧菌，以亚硝　酸为能源，以二氧化碳为碳源，同时能以亚　或为电子受体氧化甲酸、丙酸、单甲胺和二　甲胺，但这些有机物并不用于细胞物质的合　成¨１　．菌体具有前述厌氧氨氧化菌的细胞结构　特征．在细胞膜中，阶梯烷膜脂占细胞总脂类　６３　．１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列分析表明，该菌与　“Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｂｒｏｃａｄｉａ　ａｎａｍｏｘｉｄａｎｓ”的相似性　最高，达９４　＿　１．它在ＧｅｎＢａｎｋ中的注册号　为ＤＱ４５９９８９．　２．３　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ　ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉｓ　该种发现于生物滤池中，名字中　“Ｋｕｅｎｅｎｉａ”是在厌氧氨氧化领域作出杰出贡献　的荷兰微生物学家Ｊ．Ｇｉｊｓ　Ｋｕｅｎｅｎ的姓氏，　图６　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ　ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉｓ菌落的电　子显微镜照片　Ｆｉｇ．６　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｇｒａｐｈ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ　ｓｔｕｔｔｇａｎｉｅｎｓｉｓ　ｃｏｌｏｎｉｅｓ　为ＡＦ３７５９９５．　２．４　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ和Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ　两菌都发现于英国Ｐｉｔｓｅａ垃圾填埋场的　污水处理厂，它们名字中的“Ｓｃａｌｉｎｄｕａ”表示细　菌细胞中具有阶梯烷，“ｂｒｏｄａｅ”和“ｗａｇｎｅｒｉ”是　为了纪念厌氧氨氧化反应的第一个预言者——　奥地利理论化学家Ｅｎｇｅｌｂｅｒｔ　Ｂｒｏｄａ以及为厌　氧氨氧化菌生态学和系统发育学研究作出贡献　的德国微生物学家Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｗａｇｎｅｒｌ＿３。］而命名．　两菌均为化能自养型的兼性厌氧菌．菌体呈球　形，直径大约１　ｔａｍ（图７）．它们能以亚为　电子受体氧化氨，以二氧化碳为唯一碳源；能将　羟氨转化成联氨．菌体具有前述厌氧氨氧化菌　的细胞结构特征，细胞膜含有阶梯烷膜脂，细胞　内拥有厌氧氨氧化体．在Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ菌　落中，细胞排列松散；而在Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ　菌落中，细胞排列紧密．两菌之间１６Ｓ　ｒＲＮＡ序　列的相似度为９３　＿３　．它们在ＧｅｎＢａｎｋ中的　注册号分别为ＡＹ２５４８８３和ＡＹ２５４８８２．　Ｂ　图７　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ　（Ａ）　和　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ（Ｂ）菌落的电子　显微镜照片　Ｆｉｇ．７　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｇｒａｐｈ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ　（Ａ）ａｎｄ　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ（Ｂ）　ＣＯｌＯｎｉｅｓ　第５期　郑平，张蕾，等：厌氧氨氧化菌的特性与分类　２．５　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｓｏｒｏｋｉｎｉｉ　该种发现于黑海的次氧化层区域，是第一　个在自然生态系统中发现的厌氧氨氧化菌　种　，化能自养型，能利用亚将氨氧化形　成氮气，以二氧化碳为唯一碳源．菌体具有前述　厌氧氨氧化菌的细胞结构特征，其厌氧氨氧化　体膜含有阶梯烷脂．１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列分析表明，　该菌与“Ｂｒｏｃａｄｉａ　ａｎａｍｍｏｘｉｄａｎｓ”、“Ｋ　ｕｅｎｅｎｉａ　ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉｓ”的相似度分别为８７．６％和　８７．９　．它在ＧｅｎＢａｎｋ　中的注册号　为ＡＹ２５７１８１．　２．６　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｊｅｔｔｅｎｉａ　ａｓｉａｔｉｃａ　该种发现于实验室生物膜反应器中，属名　“Ｊｅｔｔｅｎｉａ”是在厌氧氨氧化领域作出杰出贡献　的荷兰微生物学家Ｍｉｋｅ　Ｓ．Ｍ．Ｊｅｔｔｅｎ的姓氏，　种名“ａｓｉａｔｉｃａ”是该菌的发现地“ａｓｉａ”　．菌　体具有前述厌氧氨氧化菌的细胞结构特征．最　佳生长ｐＨ　８．０～８．５，最佳生长温度３Ｏ～３５　℃，能够耐受的亚浓度高于７　ｍｍｏ１．Ｌ＿。．　基因序列分析表明，该菌含有ＨＺＯ．１６Ｓ　ｒＲＮＡ　序列分析表明，该菌与“Ｂｒｏｃａｄｉａ”、　“Ｋｕｅｎｅｎｉａ”、“Ｓｃａｌｉｎｄｕａ”、“Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ’’　的相似性低于９４　．它在ＧｅｎＢａｎｋ中的注册　号为ＤＱ３０ｌ５１３．　２．７　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ　该种从实验室ＳＢＲ反应器中富集得到，名　字中的“ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ”代表该菌的代谢方式口　．　化能自养型，但能以亚或为电子受体　氧化甲酸、丙酸，能将羟胺转化成联氨．菌体具　有前述厌氧氨氧化菌的细胞结构特征．在细胞　中，阶梯烷膜脂占细胞总脂类的２４　㈨．它在　ＧｅｎＢａｎｋ中的注册号为ＤＱ３１７６Ｏ１．　２．８　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　ｓｕｌｆａｔｅ　该种从实验室生物转盘反应器中富集得　到，名字中的“ｓｕｌｆａｔｅ”指代谢方式＿３　．该菌的　代谢方式不同于一般厌氧氨氧化菌，能以氨为　电子供体，以硫酸盐为电子受体，将２种基质转　化为氮气和单质硫．１６Ｓ　ｒＲＮＡ分析表明，它是　浮霉状菌目中的一个种．目前未见对这种细菌　细胞形态、化学组分、代谢途径、生理生化等方　面的研究报道．　３　结　语　厌氧氨氧化是环境领域和微生物领域的一　个重大发现，对于认识氮素地球化学循环，丰富　微生物学内容，开发新型生物脱氮工艺均具有　巨大的推动作用．经历种种波折后，近年来对于　厌氧氨氧化菌的研究取得了许多突破性成果，　探明了个体形态特征、细胞化学组分特征、富集　培养与分离特征、生理生化特征和生态学特征，　提出了厌氧氨氧化的代谢模型，纯化研究了多　种厌氧氨氧化酶，分离获得了５属９种厌氧氨　氧化菌，建立了厌氧氨氧化菌科　（Ａｎａｍｍｏｘａｃｅａｅ）．这些成果的取得为自然界　氮素转化理论的深入和氮素转化过程的应用打　下了良好基础．　由于厌氧氨氧化菌生长极其缓慢，传统的　微生物学研究方法已不能满足对厌氧氨氧化菌　研究的要求，迫切需要方法创新，并重点开展如　下研究：１）建立有效的厌氧氨氧化菌分子探　针，探明其在自然生态系统中的分布，确定该菌　在氮素生物地球化学循环中的重要作用；２）继　续分离亚还原酶、联氨氧化酶、羟氨氧化还　原酶、联氨水解酶等厌氧氨氧化酶，搞清厌氧氨　氧化代谢途径；３）着手厌氧氨氧化菌的基因组　学和蛋白质组学研究，为厌氧氨氧化菌的种质　改良创造条件．　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ：　［１］郑平，徐向阳，胡宝兰新型生物脱氮理论与技术　［Ｍ］北京：科学出版社，２００４．　［２］Ｍｕｌｄｅｒ　Ａ，ｖａｎ　ｄｅ　Ｇｒａａｆ　Ａ　Ａ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ　Ｌ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄ　ｉｎ　ａ　ｄｅｎｉｔｒｉｆｙｉｎｇ　ｆｌｕｉｄｉｚｅｄ　ｂｅｄ　ｒｅａｃｔｏｒ　［Ｊ］．　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，１９９５，１　６（３）：１　７７—１８４．　［３］Ｄａｌｓｇａａｒｄ　Ｔ，Ｃａｎｆｉｅｌｄ　Ｄ　Ｅ，Ｐｅｔｅｒｓｅｎ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｎｚ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ａｎａｍｍｏｘ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｎｏｘｉｃ　ｗａｔｅｒ　ｃｏｌｕｍｎ　ｏｆ　Ｇｏｌｆｏ　Ｄｕｌｃｅ，Ｃｏｓｔａ　Ｒｉｃａ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，　２００３，４２２（６９３２）：６０６—６０８．　［４］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ．Ｊｅｔｔｅｎ　Ｍ　Ｓ　Ｍ．Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｅ　ａｎｄ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ＥＪ３．　Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２００４．５８：９９—１１７．　［５］ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｓｔａｒ　Ｗ　Ｒ　Ｉ　，Ａｂｍａ　Ｗ　Ｒ，Ｂｌｏｍｍｅｒｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｔａｒｔｕｐ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ａｎｏｘｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ：　４８０　浙江大学学报（农业与生命科学版）　第３　５卷　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｆｕｌｌ—ｓｃａｌｅ　ａｎａｍｍｏｘ　ｒｅａｃｔｏｒ　ｉｎ　Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ　Ｄ］　Ｗａｔｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，４１（１８）：　４ｌ４９－４１６３．　［６］　ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｉ　，Ｇｅｅｒｔｓ　Ｗ　Ｊ　Ｃ，ｖａｎ　Ｄｏｎｓｅｌａａｒ　Ｅ　Ｇ，ｅｌ　ａ１．Ｌｉｎｋｉｎｇ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ：ｃｅｌｌ　ｐｌａｎ，　ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ，ａｎｄ　ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｃ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　Ｄ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２００８，１　９０（２）：　７０８—７１７．　［７］　ｖａｎ　ｄｅ　Ｇｒａａｆ　Ａ　Ａ，ｄｅ　Ｂｒｕｉｊｎ　Ｐ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ　Ｌ　Ａ，ｅｔａ１．　Ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｍｉｃｒｏ－ｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ａ　Ｉｌｕｉｄｉｚｅｄ　ｂｅｄ　ｒｅａｃｔｏｒ　Ｄ］．　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（ＵＫ），１９９６，１４２（８）：２１８７—２１９６．　［８］　ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｌ　Ａ，Ｆｕｅｒｓｔ　Ｊ　Ａ，Ｓｉｎｎｉｎｇｈｅ　Ｄａｍｓｔ６　Ｊ　Ｓ，ｅｌ　ａｌ　Ｔｈｅ　ａｎａｍｍｏｘｏｓｏｍｅ：　ａｎ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ　ｉｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｈａｃｔｅｒｉａ　Ｅ３］．ＦＥＭｓ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，２３３（１）：７－１３．　［９］　ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｌ　Ａ，Ｇｅｅｒｔｓ　Ｗ　Ｊ　Ｃ，ｖａｎ　Ｄｏｎｓｅｌａａｒ　Ｅ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎａｍｍｏｘｏｓｏｍｅ：ａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ—ｂｏｕｎｄｅｄ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓ—　ｍｉｃ　ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ　ｉｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ口］Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，１６１（３）：４０１—４１０．　［１０］　Ｓｉｎｎｉｎｇｈｅ　Ｄａｍｓｔ４　Ｊ　Ｓ，Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｒｉｊｐｓｔｒａ　Ｗ　Ｉ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｎｅａｒｌｙ　ｃｏｎｃａｔｅｎａｔｅｄ　ｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅ　ｌｉｐｉｄｓ　ｆｏｒｍ　ａ　ｄｅｎｓｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ口］．Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４１９　（６９０８）：７０８—７１２．　［１１］　Ｓｉｎｎｉｎｇｈｅ　Ｄａｍｓｔ６　Ｊ　Ｓ，Ｒｉｊｐｓｔｒａ　Ｗ　Ｉ　Ｃ，Ｓｃｈｏｕｔｅｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈｏｐａｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ：　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｅｄｉｍｅｎｔａｒｙ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｒｅｃｏｒｄ［ｊ］．　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，３５（５）：５６１—５６６．　［１２］　Ｒａｔｔｒａｙ　Ｊ　Ｅ，ｖａｎ　ｄｅ　Ｖｏｓｓｅｎｂｅｒｇ　Ｊ，Ｈｏｐｍａｎｓ　Ｅ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｌａｄｄｅｒａｎｅ　ｌｉｐｉｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ口］．Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００８，１９０（１）：５Ｉ－６６．　［１３］　ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ，ＺＨＥＮＧ　Ｐｉｎｇ（张蕾，郑平）．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ＡＮＡＭＭＯＸ　ａｔｔａｃｈｅｄ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｆｉｌｍ　ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｂｅｄｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（生物　工程学报），２００８，２４（７）：１２４０—１２４７．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［１４３　瞿中和，王喜中，丁明孝．细胞生物学ＥＭ］．３版北　京：高等教育出版社，２００７．　［１５］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，Ｆｕｅｒｓｔ　Ｊ　Ａ，ｅｔ　ａｌ　Ｔｈｅ　ａｎａｍｍｏｘ　ｃａｓｅ——ａ　ｎｅｗ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｎｉｆｅｓｔｏ　ｆｏｒ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏ—ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　［Ｊ］．　Ａｎｔｏｎｉｅ　ｖａｎ　Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ，２００２，８１（１／４）：６９３－７０２．　［１６］　Ｓｃｈｏｕｔｅｎ　Ｓ，Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｋｕｙｐｅｒｓ　Ｍ　Ｍ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ　Ｓｔａｂｌｅ　ｃａｒｂｏｎ　ｉｓｏｔｏｐｉｃ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ｃａｒｂｏｎ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ＥＪ］Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００４，７Ｏ（６）：３７８５—３７８８．　［１　７］　Ｋａｒｔａｌ　Ｂ，Ｒａｔｔｒａｙ　Ｊ，ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｌ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ“Ａｎａｍｍｏｘｏｇｌｏｂｕｓ　ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ”ａ　ｎｅｗ　ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｄ］．　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，３０（１）：３９—４９．　［１８］　Ｋａｒｔａｌ　Ｂ，ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｌ，Ｒａｔｔｒａｙ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　“Ｂｒｏｃａｄｉａ　ｆｕｌｇｉｄａ”：ａｎ　ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｄ］．　ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００８，６３（１）：４６—５５．　［１９］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ．Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，Ｊｅｔｔｅｎ　Ｍ　Ｓ　Ｍ．Ｋｅｙ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ口］．Ａｐｐｌｉｄｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｌ９９９，６５（７）：３２４８—３２５０．　［２０］　Ｅｇｌｉ　Ｋ，Ｆａｎｇｅｒ　Ｕ，Ａｌｖａｒｅｚ　Ｐ　Ｊ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｒｏｍ　ａ　ｒｏｔａｔｉｎ＇ｇ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｔａｃｔｏｒ　ｔｒｅａｔｉｎｇ　ａｍｍｏｎｉｕｍ～ｒｉｃｈ　ｌｅａｃｈａｔｅ［Ｊ］．Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，ｌ７５（３）：　１９８—２０７．　［２１］　Ｄａｐｅｎａ—Ｍｏｒａ　Ａ，Ｆｅｒｎｄｎｄｅｚ　Ｉ，Ｃａｍｐｏｓ　Ｊ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　Ａｎａｍｍｏｘ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｂｙ　ｂａｔｃｈ　ｔｅｓｔｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｇａｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００７，４０（４）：８５９－８８５．　［２２］　ｖａｎ　ｄｅ　Ｇｒａａｆ　Ａ　Ａ，ｄｅ　Ｂｒｕｉｊｎ　Ｐ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ　Ｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　１５　Ｎ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　ａ　ｆｌｕｉｄｉｚｅｄ　ｂｅｄ　ｒｅａｃｔｏｒ　［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（ＵＫ），１９９７，１４３（７）：２４１５—２４２１．　［２３］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ　Ｅ，Ｍａｎｇｅｎｏｔ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ｇｅｎｏｍｅ口］．Ｎａｔｕｒｅ，２００６，４４０　（７０８５）：７９０—７９４．　［２４］　Ｓｃｈａｌｋ　Ｊ，ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　Ｓ．Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ　ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，３９　（１８）：５４０５—５４ｌ２．　［２５］　Ｓｈｉｍａｍｕｒａ　Ｍ，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ　Ｔ，Ｓｈｉｇｅｔｏｍｏ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｍｕｌｔｉｈｅｍｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ａ　ｈｙｄｒａｚｉｎｅ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ　ｆｒｏｍ　ａｎ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ口］　Ａｐｐｌｉｄｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，７３（４）：　１０６５一ｌ０７２．　［２６］　Ｓｈｉｍａｍｕｒａ　Ｍ，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ　Ｔ，Ｓｈｉｎｙａ　Ｋ，ｅｌ　ａ１．　Ａｎｏｔｈｅｒ　ｍｕｌｔｉｈｅｍｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ　ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ．　ａｂｕｎｄａｎｔｌｙ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ａｎ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｅｓｉｄｅｓ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒａｚｉｎｅ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ［Ｊ］．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００８，１０５　（３）：２４３—２４８．　［２７３　ＣｉｒｐｕｓＩ　Ｅ　Ｙ，ｄｅＢｅｅｎＭ，Ｏｐ　ｄｅｎＣａｍｐＨ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．　Ａ　ｎｅｗ　ｓｏｌｕｂｌｅ　１０　ｋＤａ　ｍｏｎｏｈｅｍｅ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｆ一５５２　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ“Ｋｕｅｎｅｎｉａ　ｓｔｕｔｔｇａｒｔｉｅｎｓｉｓ”［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２５２　（２）：２７３—２７８．　第５期　郑平，张蕾，等：厌氧氨氧化菌的特性与分类　４８１　［２８３　Ｈｕｓｔｏｎ　Ｗ　Ｍ，Ｈａｒｈａｎｇｉ　Ｈ　Ｒ，Ｌｅｅｃｈ　Ａ　Ｐ，ｅｌ　ａ１．　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｍａｊｏｒ　ｆ—ｔｙｐｅ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｅｎｃｏｄｅｄ　ｂｙ　ｇｅｎｅ　ｋｕｓｔｃ０５６８　ｆｒｏｍ　Ｋｕｅｎｅｎｉａ　““￡￡ｇａ　Ｐ”５　５　ａｓ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，２００７，５　１　（１）：２８—３３　［２９］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｆｕｅｒｓｔ　Ｊ　Ａ，Ｋｒａｍｅｒ　Ｅ　Ｈ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｓｓｉｎｇ　ｌｉｔｈｏｔｒｏｐｈ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ｎｅｗ　ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅ［盯Ｎａｔｕｒｅ，　１９９９，４００（６７４３）：４４６－４４９．　［３Ｏ］　Ｋａｒｔａｌ　Ｂ，　ｖａｎ　Ｎｉｆｔｒｉｋ　Ｌ，　Ｓｌｉｅｋｅｒｓ　Ｏ，　ｅｔ　ａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，　ｅｃｏ—ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ＿Ｊ］Ｒｅｖｉｅｗｓ　ｉｎ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，３（３）：　２５５—２６４　［３１］　Ｓｃｈｍｉｄ　Ｍ，Ｔｗａｃｈｔｍａｎｎ　Ｕ，Ｋｌｅｉｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｇｅｎｕｓ　ｌｅｖｅｌ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｃａｔａｌｙｚｉｎｇ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　［．Ｉ］　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，２３（１）：９３　１Ｏ６　ｒ３２］　Ｓｃｈｍｉｄ　Ｍ．Ｗａｊｓｈ　Ｋ．Ｗｅｂｂ　Ｒ．　“ｆ．Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　“Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｂｒｏｄａｅ”，ｓｐ　Ｎｏｖ．，Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ“Ｓｃａｌｉｎｄｕａ　ｗａｇｎｅｒｉ”，ｓｐ　Ｎｏｖ．，ｔｗｏ　ｎｅｗ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ＿Ｊ］　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，２６（４）：５２９　５３８　［３３］　Ｔｓｕｓｈｉｍａ　１，Ｏｇａｓａｗａｒａ　Ｙ，Ｋｉｎｄａｉｃｈｉ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｉｇｈ——ｒａｔｅ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—－　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ（ａｎａｍｍｏｘ）ｂｉｏｆｉｌｍ　ｒｅａｃｔｏｒｓ［Ｊ］　Ｗａｔｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，４１（８）：１　６２３—１　６３４．　［３４］　Ｉ　ｉｕ　Ｓ，Ｙａｎｇ　Ｆ，Ｇｏｎｇ　Ｚ．ｅｔ　ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｎｌ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ　ｔｏ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ　ａｕｔｏｔｒｏｐｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ａｎｄ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｒｅｍｏｖａｌ　［Ｊ］　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００８，　９９（１　５）：　６８１７　６８２５．　［３５＿　Ｋｕｙｐｅｒｓ　Ｍ　Ｍ　Ｍ，Ｓｌｉｃｋｅｒｓ　Ａ　Ｏ，ｇａｖｉｋ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．　Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｂｌａｃｋ　Ｓｅａ［ＪＪ．Ｎａｔｕｒｅ，２００３，４２２（６９３２）：　６０８　６１１　［３６］　Ｔｈａｍｄｒｕｐ　Ｂ，Ｄａｌｓｇａａｒｄ　Ｔ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎ２　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｔｏ　ｎｉｔｒａｔｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍａｒｉｎｅ　ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，６８（３）：１３ｌ２—１３１８．　［３７］　Ｓｃｈｕｂｅｒｔ　Ｄ　Ｊ，Ｄｕｒｉｓｃｈ—Ｋａｉｓｅｒ　Ｅ，Ｗｅｈｒｌｉ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．　Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｔｒｏｐｉｃａｌ　ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ　ｓｙｓｔｅｍ（Ｉ　ａｋｅ　Ｔａｎｇａｎｙｉｋａ）［Ｊ］　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，８（１０）：１８５７—１８６３　［３８］　Ｚｈａｎｇ　Ｙ，Ｒｕａｎ　Ｘ　Ｈ，Ｏｐ　ｄｅｎ　Ｃａｍｐ　Ｈ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ａｂｕｎｄａｎｃｅ　ｏｆ　ａｅｒｏｂｉｃ　ａｎｄ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ　ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｘｉｎｙｉ　Ｒｉｖｅｒ（Ｃｈｉｎａ）［Ｊ］．　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，９（９）：２３７５—２３８２．　［３９］Ｔｈｉｒｄ　Ｋ　Ａ，Ｓｌｉｅｋｅｒｓ　Ａ　Ｏ，Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，ｅｌ口　．Ｔｈｅ　ＣＡＮＯＮ　ｓｙｓｔｅｍ（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ　ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ—　ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｖｅｒ　ｎｉｔｒｉｔｅ）ｕｎｄｅｒ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ：　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００１，２４（４）：５８８－５９６．　［４ｏ］　Ｎａｋａｊｉｍａ　Ｊ，Ｓａｋｋａ　Ｍ，Ｋｉｍｕｒａ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎａｍｍｏｘ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｆｒｏｍ　ｍａｒｉｎｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｂｉｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００８，７７（５）：　１１５９　１１６６　［４１］　Ｔａｌ　Ｙ，Ｗａｔｔｓ　Ｊ　Ｅ　Ｍ，Ｓｃｈｒｅｉｅｒ　Ｈ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　（ａｎａｍｍｏｘ）　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｆｉｘｅｄ—ｆｉｌｍ　ｂｉｏｆｉｈｅｒｓ　ｏｆ　ａ　ｍａｒｉｎｅ　ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］　Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，７２（４）：２８９６—２９０４．　［４２］　Ｔｓｕｓｈｉｍａ　Ｉ，　Ｋｉｎｄａｉｃｈｉ　Ｔ，　Ｏｋａｂｅ　Ｓ，　ｅｔ　ａ１．　Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｂｙ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　５Ｊ］．　Ｗａｔｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，４１（４）：７８５—７９４．　［４３］　Ｓｔａｒｒ　Ｍ　Ｐ，Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｊ　Ｍ．Ｇｅｎｕｓ　Ｐｌａｎｃｔｏｒｎｙｃｅｓ　Ｇｉｍｅｓｉ　［Ｍ＿Ｂｅｒｇｅｙｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，１９９５．　［４４］　Ｊｅｔｔｅｎ　Ｍ　Ｓ　Ｍ，Ｏｐ　ｄｅｎ　Ｃａｍｐ　Ｈ　Ｊ　Ｍ，Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ　ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆａｍｉｌｙ　Ａｎａｍｍｏｘａｃｅａｅ［Ｍ］／／Ｈｅｄｌｕｎｄ　Ｂ，Ｋｒｉｅｇ　Ｎ　Ｒ，Ｐａｓｔｅｒ　Ｂ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ　Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ．　２ｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００９　［４５］　Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ（；，Ｊｅｔｔｅｎ　Ｍ　Ｓ　Ｍ　Ｅｘｔｒａｏｒ出ｎａｒｙ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］ＡＳＭ　Ｎｅｗｓ，２００１，　６７（９）：４５６　４６３．　［４６］　Ｓｔｒｏｕｓ　Ｍ，Ｈｅｉｊｎｅｎ　Ｊ　Ｊ，Ｋｕｅｎｅｎ　Ｊ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ　Ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｂａｔｃｈ　ｒｅａｃｔｏｒ　ａｓ　ａ　ｐｏｗｅｒｆｕｌ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｓｌｏｗｌｙ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ　口］．　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｌ９９８，５０（５）：５８９　５９６　［４７］　Ｑｕａｎ　Ｚ　Ｘ，Ｒｈｅｅ　Ｓ　Ｋ，Ｚｕｏ　Ｊ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ａ　ｇｒａｎｕｌａｒ　ｓｌｕｄｇｅ　ａｎａｅｒｏｂｉｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ—ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ（ａｎａｍｍｏｘ）ｒｅａｃｔｏｒ　［ＪＪ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，１０（１１）：　３】３０—３】３９