２０１４ ＮＯ．２３ 论 著 三氧化二砷对肠癌ＨＣＴ１ １ ６细胞Ｓｍａｄｓ表达的影响 冯越ｔ 蔡士昌 蔡朋朋ｚ 李雪松ｚ 孙智睿， 费洪新 徐广有ｓ １．齐齐哈尔医学院２００９级学生，黑龙江齐齐哈尔１６１０００；２．齐齐哈尔医学院附属三院消化科，黑龙江齐齐哈尔１６１０００； ３．齐齐哈尔医学院附属三院心内科，黑龙江齐齐哈尔１６１０００；４．齐齐哈尔医学院组胚室，黑龙江齐齐哈尔１６１０００； ５．齐齐哈尔医学院微形态实验室，黑龙江齐齐哈尔 １６１０００ 【摘要】目的研究三氧化二砷对肠癌细胞ＨＣＴ１ １６中ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路的Ｓｍａｄｓ相关基因表达变化，阐述Ｓｍａｄｓ相关 基因在肠癌ＨＣＴ１１６细胞中的变化规律，探讨肠癌发生的病理机制，和分析Ａｓ２０３作用新靶点。方法实验分空白对照组， 低剂量Ａｓ２０３组，中剂量Ａｓ２０３组，高剂量Ａｓ２０３组，在体外培养７２ ｈ后取出细胞用于实验。采用免疫荧光化学术和 Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７蛋白的表达变化。结果三氧化二砷为０．５～２．５ ｔｘｒｎｏｌ／Ｌ时，Ｓｍａｄ３分别为（１９．９４￣１．５７）， （３４．１７＋１．２８），（３９．６４＿＋１．６３），Ｓｍａｄ７分别为（３１．５３＋０．６７），（２１．６９￣０．９４），（２０．０４￣０．３１），与对照组Ｓｍａｄ３（１６．６１￣０．６４），Ｓｍａｄ７ ３ （８．６１￣０．６４）比较，各组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示三氧化二砷能同时下调Ｓｍａｄ７蛋白的表达，上调 Ｓｍａｄ３蛋白的表达而对肿瘤细胞的生长进行。结论ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路的Ｓｍａｄ３。７在肠癌发生发展起重要的 作用，三氧化二砷可通过改变Ｓｍａｄ３，７表达，而对肠癌细胞ＨＣＴ１１６生长进行抑制。 【关键词】三氧化二砷；ＨＣＴ１１６；Ｓｍａｄ３；Ｓｍａｄ７ 【中图分类号】Ｒ７３５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７４—０７４２（２０１４）０８（ｂ）一００６４—０３ Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｒｓｅｎｉｃ Ｔｒｉｏｘｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄｓ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｉｎｔｅｓｔｉ－ ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ＨＣＴ１ １６ ＦＥＮＧ Ｙｕｅｌ ＣＡＩＳｈｉｃｈａｎｇ￣ＣＡＩＰｅｎｃｅｎ ＬＩＸｕｅｓｏｎｇｅ ＳＵＮＺｈｉｒｕｉ３ ＦＥＩＨｏｎｇｘｉｎ４ ＸＵＧｕａｎｇｙｏｕ５ １．Ｓｔｕｄｅｎｔ ａｄｍｉｔｔｅｄ ｉｎ ２００９，Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｅｒ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，１６１０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｔ１１ｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃｌａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｅｒ，Ｈｅｉ｜ｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， １６１０００，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｅｒ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，１６１０００， Ｃｈｉｎａ； ４．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｅｒ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，１６１０００，Ｃｈｉｎａ； ５．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｅｒ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，１６１０００，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｔｒｉｏｘｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｓｍａｄｓ ｇｅｎｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＧＦ—ｂｅｔａ／ Ｓｍａｄｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＨＣＴ１ １６，ｅｌａｂｏｒａｔｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄｓ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＨＣＴ１ １６，ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｎｅｗ ｔａｒｇｅｔｓ ｏｆ Ａｓ２０３．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｏｒｌ ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗ ｄｏｓｅ Ａｓ２０３ ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ ｄｏｓｅ Ａｓ２０３ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ Ａｓ２０３ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ ７２ ｈｏｕｒｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ Ｓｍａｄ３，Ｓｍａｄ７ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｒｓｅｎｉｃ ｔｒｉｏｘｉｄｅ ｗａｓ ｆｒｏｍ ０．５ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ｔｏ ２．５ ｐ＋ｍｏｌ／Ｌ，Ｓｍａｄ３ ｗａｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ １９．９４￣ １．５７，３４．１７￣１．２８，３９．６４￣１．６３，Ｓｍａｄ７ ｗａｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ３１．５３＋０．６７，２１．６９￣０．９４，２０．０４￣０．３１，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｓ （Ｓｍａｄ３ １６．６１￣０．６４，Ｓｍａｄ７ ３８．６１￣０．４６），ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｒｓｅｎｉｃ ｔｉｒｏｘｉｃｌ－ｃｏｕｌｄ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ７，ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｓｍａｄ３。７ ｏｆ ＴＧＦ－１３／Ｓｍａｄｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ，ａｒｓｅｎｉｃ ｔｒｉｏｘｉｄｅ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ＨＣＴ１ １６ ｃｅｌｌｓ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｍａｄ３，７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ａｒｓｅｎｉｃ ｔｉｒｏｘｉｄｅ；ＨＣＴ１ １６；Ｓｍａｄ３；Ｓｍａｄ７ 大肠癌是消化系统常见的肿瘤．已跃居成为恶性肿瘤死因的 第４位『１］。大肠癌的发生发展是多因素、多阶段、多步骤的过程， 涉及一系列基因和因子的变化，其中ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ信号传 【基金项目１ ２０１２年黑龙江省教育厅项目（１２５２１６３４），２０１３年黑龙江省 导通路是控制细胞增殖和诱导凋亡的重要通路，在肿瘤的发生， 大学生创新创业项目（２０１３１ １２３００２０）。 发展过程中具有重要的作用。三氧化二砷（Ａｓ２０３）的抗肿瘤效果 【作者简介】冯越（１９９０一），女，黑龙江人，本科，临床学生，研究方向：中药 抗肿瘤的机制。 已得到多数学者肯定 ，Ａｓ２０３主要是通过抑制细胞增值，诱导 【通讯作者】蔡朋朋（１９８１一），女，主治医师，研究方向：消化系肿瘤基础与 细胞分化和凋亡起到抗肿瘤的目的，三氧化二砷对体外肠癌细 临床。 胞的作用。国内研究较少，先期研究已经表明Ａｓ２０３对肠癌 ６ ４ 中外医疗Ｃｈｉｎａ＆Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 论 著 ＨＣＴ１１６细胞具有明显抑制作用，且随浓度增加而增强，本研究 继续将三氧化二砷作用于肠癌ＨＣＴ１１６细胞，应用免疫荧光化学 术。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ观察ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ信号通路中重要基因 Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７在人低分化结肠腺癌细胞株ＨＣＴ一１ １６中的表达， 及ＡＳ２０３干预前后的变化情况．阐述ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路中 Ｓｍａｄｓ相关分子在肠癌ＨＣＴ１１６细胞中有关分子的变化规律，探 Ｃｈｉｎａ＆Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄ—ｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ口固——■■鼍＿ 注：与对照组比较，．Ｐ＜０．０５。 ２．２ Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｓｍａｄｓ相关基因 Ｓｍａｄ３蛋白：对照组，及各浓度Ａｓ２０３组相比较，Ｓｍａｄ３蛋 白表达逐渐增高，说明随着肿瘤细胞抑制作用的增加，Ｓｍａｄ３表 达增多．其下游信号的传导。见图２。 讨肠癌发生的病理机制和分析Ａｓ２０３作用新靶点，现报道如下。 １资料与方法 １．１一般资料 Ａｓ２０３购自哈尔滨伊达药业，人肠癌细胞ＨＣＴ１１６由中科院 上海细胞库提供，Ｃ０２培养箱购自日本ＳＡＮＹＯ公司，ＯＬＹＭＰＵＳ 倒置显微镜由奥地利生产，Ｓｍａｄｓ抗体购于博奥森公司，其余二 抗等购于武汉博士得公司。 １．２细胞培养 复苏后的ＨＣＴ１１６细胞接种于培养瓶中，加入１６４０培养液 含热灭活胎牛血清，２ ｇ／ＬＮａＨＣ０３，青霉素和链霉素各１００ ｍｇ／Ｌ） 中，置于恒温培养箱中培养（条件为３７℃，５％Ｃ０：浓度及饱和湿 度）。然后用０．１５％胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实 验。 １．３分组及药物处理 将５ｘｌ０４个／ｍＬ单细胞悬液接种在９６孔培养板中．其中空 白对照组加１０％的培养液，用于试验的低剂量组加入０．５￣ｍｏｌ／Ｌ 浓度的Ａｓ２０３，中剂量组加１．５ ｔＬｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２０３，高剂量组加２．５ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２０３液，在培养７２ ｈ后取出细胞用于实验。 １．４间接免疫荧光术检测Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７蛋白的表达 收集对数生长期的ＨＣＴ一１１６细胞，用０．１５％胰酶消化成单 细胞悬液后，以１ｘ１０Ｓ／ｍＬ细胞浓度接种在放有玻片的２４孑Ｌ培养 板中，１ ｍＬ／孑Ｌ，３７℃，５％ＣＯ：孵箱中培养７２ ｂ，待细胞贴壁后，弃去 上清液，换成无血清的培养液，继续培养４８ ｈ后，吸尽上清液， ＰＢＳ洗５ ｍｉｎｘ３次，取出玻片，中性树胶封片（有细胞面向上），过 夜晾干，４℃保存备用，间接免疫荧光术检测，按试剂盒说明书进 行操作（Ｓｍａｄ蛋白抗体浓度为１：１００，荧光抗体浓度为１：５０）。用 荧光显微镜观察，结果以荧光强度表示。 １．５ ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｓｍａｄｓ相关蛋白表达 将上述各组Ａｓ２０３处理过的培养细胞，用ＰＢＳ进行漂洗，裂 解细胞，离心然后灌凝胶上样，将蛋白样品加入５Ｏ ｇ／孑Ｌ电泳分 离，转至ＰＶＤＦ膜然后上摇床后用ＴＢＳ封闭抗原１ ｈ．加入一抗 （Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７），４℃过夜，ＴＢＳ洗膜后加入二抗稀释液（用封闭液 进行稀释，稀释浓度为１：２００ ｏ１室温孵育膜ｌｈ，ＴＢＳ洗膜３次，１３一 ａｃｔｉｎ为参照．拍照。 １．６统计方法 采用ＳＰＳＳ １２．０软件对数据进行统计分析，计量资料用均 数±标准差仁±ｓ）表示，比较用ｔ检验。 ２结果 ２．１免疫荧光化学术检测ｓｍａｄ３，Ｓｍａｄ７蛋白表达 见表１ 表１ Ａｓ２０３作用下ＨＣＴ１ １６细胞Ｓｍａｄｓ蛋白荧光强度值Ｇ虹） 图２对照。０．５ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ。１．５ ｐｍｏＶＬ。２．５ ｐｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２０３，Ｉ￣－ａｃｔｉｎ Ｓｍａｄ７蛋白的表达：对照组，以及各浓度Ａｓ２０３相比，Ｓｍａｄ７ 蛋白表达逐渐减少，表明随Ａｓ２０３浓度的增加。肿瘤细胞的受到 抑制的作用增强，Ｓｍａｄ７表达减少，减弱了对ＴＧＦ一６／Ｓｍａｄｓ信号 通路的负反馈调节作用。见图３。 一 图３对照。０．５ ｐｍｏｌ／Ｌ。１．５ ｐｍｏＹＬ。２．５ ｐｍｏＶＬ Ａｓ２０３。￣－ａｃｔｉｎ ３讨论 研究显示，与肿瘤发生高度相关的ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路 由ＴＧＦ一６超家族及其受体，Ｓｍａｄｓ蛋白及其调节基因组成。ＴＧＦ一 ６／Ｓｍａｄｓ通路在肿瘤发生发展过程中会出现表达的异常，而使肿 瘤细胞生物学行为改变 。Ｅｔ前比较清楚的是，在肿瘤发展的早 期，ＴＧＦ一６１能够抑制肿瘤细胞增殖，使细胞停留在Ｇｌ期，诱导 细胞凋亡，但在肿瘤晚期，该信号通路中的一些因子发生突变， 使肿瘤细胞能够逃逸ＴＧＦ－￣Ｉ的抑制作用而发生增殖．这可能与 ＴＧＦ—Ｂ１下游的Ｓｍａｄｓ分子表达异常有关，所以ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ通 路在肿瘤中变化比较复杂。本研究中发现对照组Ｓｍａｄ３为 １６．６１￣０．６４，且随着三氧化二砷作用浓度的增加表达逐渐增加， 当Ａｓ２０３为２．５ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ时，Ｓｍａｄ３达到（３９．６４＋１．６３），各浓度三 氧化二砷作用下的Ｓｍａｄ３表达，相比正常对照组，均差异有统计 学意义（Ｐ＜０．０５）。实验表明在体外培养的肠癌细胞ＨＣＴ１１６中， 随着肿瘤细胞数目的减少和细胞活动相对静止期时。Ｓｍａｄ３表 达逐渐增多．提示Ｓｍａｄ３在肿瘤早期或相对稳定时表达较高。已 有研究表明．缺乏Ｓｍａｄ３的小鼠在幽门螺杆菌感染和炎症反应 下更易发生结直肠癌［６１．上述研究说明在肿瘤发展过程中．Ｓｍａｄ３ 可能具有抑制肿瘤的作用．其中ＴＧＦ一６１在肿瘤发展的早期具有 抑制肿瘤发展的作用，也可能是通过Ｓｍａｄ３的表达来实现的。在 整个Ｓｍａｄ信号通路中，除了上述调节型Ｓｍａｄ １，２，３等，还包括 抑制型Ｓｍａｄ ６，７。它们不直接参与信号的传递但对整个通路具 有负作用。Ｓｍａｄ７位于染色体１８ｑ２１上，该位点等位基因的 丢失见于多种恶性疾病，并且与死亡率高，易发生转移有关。 Ｓｍａｄ７对ＴＧＦ—Ｂ家族的信号传递中起负反馈调节作用，Ｓｍａｄ７ 表达的紊乱，可影响细胞对ＴＧＦ—Ｂ的应答，从而促进细胞的恶 性进展。Ｎａｋａｇａｗａ在体外实验中发现Ｓｍａｄ７在胰腺癌中有较高 Ｃｈｉｎａ＆Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ中外医疗 ６ ５ ２０１４ —Ｎ０．２３ Ｃｈｉｎａ＆—Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 论 的表达，将Ｓｍａｄ７基因转染至胰腺癌细胞。会使其恶性度增高， 裸鼠动物模型发生肿瘤机会增加，提示Ｓｍａｄ７表达增高有可能 促进肿瘤的发生ｔＴｌ。同时Ｇｕｌｕｂｏｖａ等［８１在１４２例结直肠癌患者 中，１１０例肿瘤标本（７７．４％）中抑制性蛋白Ｓｍａｄ７阳性表达，１１９ 例患者（７６．３％）肿瘤细胞膜上ＴＧＦ－Ｒ表达阳性。该研究中，对照组 Ｓｍａｄ７阳性表达（３８．６１￣０．６４，２．５）ｌｘｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２０３组则为（２０．０４＋ 著 【２】吴鹏飞，孔荣，邱宏春，等．全反式维Ａ酸联合三氧化二砷治疗急性早 幼粒细胞性白血病的临床研究［Ｊ】．医学研究杂志，２０１０，３（２９）：１２３— １２５． 【３姜华．３】三氧化二砷抗肿瘤作用的机制研究啪．中国现代药物应用，２０１２， ２０（６）：７４－７５． ［４】龙兴震，张信江．三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤ＲＤ细胞株凋亡的实 验研究叨．现代预防医学，２０１ １，２３（３８）：４９４５—４９４７． 【５】秦庆华，姚咏明．转化生长因子ｐ信号通路研究进展［Ｊ］．医学研究杂志， ２０１２，１０（４１）．５－９． 【６】Ｔｉａｎ Ｍ，Ｎｅｉｌ ＪＲ，Ｓｃｈｉｅｍａｎｎ ＷＰ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅ ０．３１），即随着三氧化二砷对肿瘤细胞抑制作用的增强。Ｓｍａｄ７表 达逐渐减少，各浓度三氧化二砷用药组和对照组比较，Ｐ＜０．０５，差 异有统计学意义，这与上述研究结果类似。在该研究中可能是三 氧化二砷使肿瘤细胞表达Ｓｍａｄ７减少．进而减弱了对ＴＧＦ的反 ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ．Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ，２０１ １，２３（６）：９５１—９６２． ［７】Ｎａｋａｇａｗａ Ｔ，Ｌｉ ＪＨ，Ｇａｒｃｉａ Ｇ，ｅｔ ａ１．ＴＧＦ－ｂｅｔａ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｍ ｖｉａ ｐａｒａｌｌｅｌ ｂｕｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｓｍａｄ ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，２０１Ｍ，６６（２）：６０５－６１３． 【８】Ｇｕｌｕｂｏｖａ Ｍ，Ｍａｎｏｌｏｖａ Ｉ，Ａｎａｎｉｅｖ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ＴＧＦ－ＩＭ ａｎｄ Ｓｍａｄ７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｌｌ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ 馈抑制作用，从而使ＴＧＦ对其下游的Ｓｍａｄ２，３等发挥作用， 说明Ｓｍａｄ７表达的异常是肠癌的重要分子特征。 该研究中Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７表达在４组中均差异有统计学意 义，提示两者均参与结肠癌的发生、发展过程，Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ７表 达的异常很可能成为结肠癌重要的分子特征．这还待于统计学 上的筛选和确认，上述研究表明ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路可能是 三氧化二砷发挥作用的重要靶点之一，上述基因只是肿瘤细胞 增殖和凋亡等众多基因网络中的一员．Ｓｍａｄｓ与胞外信号调 ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔｓｔａｓｉａｓ ．ＡＰＭＩＳ，２０１３，１２１（１ ｏ）：９６７—９７５． ［９］花芳，余娇娇，孙巍，等．ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄ３信号参与介导ＴＲＢ３的促肿瘤作 用【Ｊ】．中国药理学通报，２０１３，２９（３）：３２３—３２７． ［１Ｏ］Ｒａｏ Ｃ，Ｌｉｎ ＳＬ，Ｗｅｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｒｏｓｓｔｌｋ ｂｅｔａｗｅｅｎ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ＴＧＦ－ｉ３／Ｓｍａｄ？ ａｎｄ Ｗｎｔ／［３一ｅａｔｅｎｉｎ ｓｉｎａｌｇｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ Ｕ】．Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｄａ Ｘｕｅ Ｘｕｅ Ｂａｏ， 节激酶（ＭＡＰＫ）通路、核转录因子一ＫＢ（ＮＦ—ＫＢ）等相互作用 ”，其 问的更详细的因果关系以及机制有待进一步研究。 【参考文献】 【ｌ】Ｗｅｉｔｚ Ｊ，Ｋｏｃｈ Ｍ，Ｄｅｂｕｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｆＪ］．Ｌａｎｃｅｔ，２００５，３６５ （９４９５）：１５３—１６５． ２０１３，４２（５）：５９１—５９６． 【１１］王文，任玲，王健楠．ＭＡＰＫ信号通路与细胞凋亡的关系【Ｊ］．中国实用 医药，２０１０，１５（５）：２６０—２６１． （收稿日期：２０１４—０５—０２） （上接第６１页） ［６１欧阳文献，唐莲，张慧，等．婴儿巨细胞病毒感染的临床特征、诊治方法 ＣＭＶ感染状况，尿液中ＣＭＶ—ＤＮＡ检测己被证实可用于判断婴 幼儿巨细胞病毒感染，值得推广。 及近期预后分析【Ｃ］，，第十一届全国儿科肝脏疾病暨第十届全Ｉ￣ｌＪＬ科 感染性疾病学术会议论文汇，２０１２． ［参考文献】 ［１］Ｒｅｉｔｅｒｅｒ Ｆ，Ｄｏｒｈｕｓｃｈ ＨＪ，Ｕｒｌｅｓｂｅｒｇｅｒ Ｂ．Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ａｓｓｏｃｉａｅｄ ｎｅｏｎａ— ［７】王静，陶枫．婴幼儿巨细胞病毒肺炎４２例临床分析叨．天津医药，２０１２， ４０（３）：２９４－２９５． ｔａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ－Ｍｉｋｉｔｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ ｃａｕｓａｌ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ［Ｊ］．Ｅｕ— ｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００９（２）：４６０—４０２． 【２】Ｒｉｃｅ ＧＰ，Ｓｃｈｒｉｅｒ ＲＤ，Ｏｌｄｓｔｏｎｅ ＭＢ．Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｉｆｅｔｎｓ ｈｕｍａｎ ｌｙｍ— ｐｈｏｅｙｔｅｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ：ｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｔｏ ｉｍｍｅｄｉａｔｅ—ｅａｒｌｙ 【８】孟繁荣，谢贝刘志辉．巨噬细胞对结核分枝杆菌免疫反应的研究进展田． 现代医院，２０１３，１３（１２）：１１１－１１３． ［９］杜心，白晶．Ｒｈ因子溶血病伴巨细胞性肝炎１例临床病例分析 ．中 国现代医生．２０１１（１５）：４５－４６． ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＡ）， ２０１ １：６１３４－６１３８． ［１Ｏ］杜慧敏，徐珏，黄三雄，等．８阿片受体激动剂对ＬＰＳ诱导的巨噬细胞 凋亡及坏死的影响［Ｊ】．中国现代医生，２０１３：（７）：６８３—６８５． ［１１］任意荣．婴幼儿巨细胞病毒肺炎３２例临床分析［Ｊ］．现代中西医结合 杂志，２０１０，１９（２）：２０５—２０６． ［３】冯术青，朱梦波，闫兴双，等．实时定量聚合酶链反应在异基因造血干细 胞移植后巨细胞病毒感染的诊断和治疗中的应用ｍ．白血病・淋巴 瘤，２０１２，２１（２）：１７９—１８１． ［１２］唐娟，李东明．尿巨细胞病毒定量检测在婴儿巨细胞病毒感染诊治中 的意义［Ｊ】．西南国防医药，２０１０（１）：５３—５４． 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