假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2019.03.006

云oodResearchAndDevelopment食品研究与开发圆园19年2月

第40卷第3期

31

假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化

及其抗氧化特性研究

叶广彬，陈源红，王长丽，曹德民，李根亮*（右江民族医学院，广西百色533000）

（exopolysaccharide，（lacticacidbacteria，摘要：从东北自然酸菜发酵液中筛选得到一株高产胞外多糖EPS）的乳酸菌LAB），经生理生化试验、形态学观察及分子生物学试验鉴定该菌株为假肠膜明串珠菌（Leuconostocpseudomesen原（38.42依2.15）Leu.pseudomesenteroides能够产生g/L的EPS，且表现出良好的体外抗氧化活性，清除能力随着浓度的增（92.37依2.34）%。2.45）%、（82.78依3.76）%、（38.34依3.28）%和

结果表明，teroides）。以该菌株为供试菌进行发酵产糖及分离纯化EPS，并采用7种方法测定纯EPS的抗氧化能力。

·、加而增强，DPPH·、OH、O2-·H2O2、和NO2-清除率及Fe2+螯合能力分别为（65.34依3.）%、（78.24依3.52）%、（77.48依关键词：乳酸菌；假肠膜明串珠菌；胞外多糖；分离纯化；抗氧化性

Separation，PurificationandAntioxidantActivityofExopolysaccharidefromYEGuang-bin，CHENYuan-hong，WANGChang-li，CAODe-min，LIGen-liang*（YoujiangMedicalUniversityforNationalities，Baise533000，Guangxi，China）

粤遭泽贼则葬糟贼：Alacticacidbacteria（LAB）withhighexopolysaccharide（EPS）-producingabilitywasisolatedfromliquidsampleofpickleChinesecabbage.ThestrainwasidentifiedasLeuconostocpseudomesenteroidesaccordingtophysiologicalandbiochemicalmethods.Inaddition，theEPSwaspurifiedandtheantioxidantcapacitywasdetectedwith7kindsdifferentmethods.Theresultshowedthat，theyieldofEPSwas（38.42依2.15）g/L.The

Leuconostocpseudomesenteroides

EPShadgoodantioxidantactivityinvitro，andthescavengingactivityofEPSwasconcentration-dependent.The3.52）%，（77.48依2.45）%，（82.78依3.76）%，（38.34依3.28）%and（92.37依2.34）%respectively.

，，scavengingvaluesofEPSforDPPH··OH，O2-·H2O2，NO2-andFe2+wereabout（65.34依3.）%，（78.24依

运藻赠憎燥则凿泽：lacticacidbacteria；Leuconostocpseudomesenteroides；exopolysaccharide；separationandpu原rification；antioxidantactivity

引文格式：

叶广彬，陈源红，王长丽，等.假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究[J].食品研究与开发，2019，40（3）：31-37

YEGuangbin，CHENYuanhong，WANGChangli，etal.Separation，PurificationandAntioxidantActivityofExopolysaccharidefromLeuconostocpseudomesenteroides[J].FoodResearchandDevelopment，2019，40（3）：31-37

（ex原乳酸菌（lacticacidbacteria，LAB）胞外多糖

基金项目：广西自然科学基金（2016GXNSFAA380177）

叶广彬（19—）研究方向：微生物资作者简介：，男（汉），助教，硕士，源挖掘与利用。生物学。

李根亮（1970—）研究方向：细胞*通信作者：，男（汉），副教授，博士，

opolysaccharide，EPS）是LAB在生长代谢过程中分泌抗肿瘤、的一种结构复杂的糖类化合物，具有抗氧化、增稠、絮凝及免疫调节等多种功能特性，广泛应用在食品、医药和化妆品等行业[1-2]。根据单糖组成不同，LABEPS可分为同源多糖（homopolysaccharides，

[3]

HoPS）和异源多糖（heteropolysaccharides，HePS）。

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

基础研究

LABHoPS32

同，分为4类根：（据糖1）单元内的连接方式和单糖成分不琢琢-1-1，，46位糖有苷键分支连结接琢构聚-D-；（合，葡2）同聚茁-D-时可糖，单葡能糖聚在组成糖琢，-1为单，糖2葡萄、组成琢-1糖，为3，葡或

由

萄糖，糖单元以茁-1，2键或茁-1，3键连接；（3）茁-D-果茁-2聚，糖6处，单有糖分组成支结构为；果（4糖）其，以他，茁例-2如，1聚键半连乳接糖，，可由能结在一致的糖单元以不同的糖苷键连接聚合而成[4-5]。构

能够产生EPS的LAB很多，大多分离于传统的发酵食品，如奶制品、黄豆酱、马奶酒、酸菜等。主要包括肠膜明串珠菌（Leuconostocmesenteroides）、植物乳杆菌（Lactobacillus.plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lb.aci原dophilus）、开菲尔乳杆菌（Lb.kefiranofaciens）、鼠李糖乳杆菌（Lb.rhamnosus）、嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus）、瑞士乳杆菌（Lb.helveticus）和食窦魏斯氏菌（Weissellacibaria）等[6-11]。随着LAB研究的不断深入，其作为食品级工业生产菌，与其他微生物相比安全性高。然而LABEPS产量低，菌株稳定性差，是制约其大规模生产的主要因素[12]。此外，由于LAB的种类及来源不同，其产生的EPS的结构和特性均有所差异。为了满足食品、医药等领域的需要，筛选具有产量高、益生作用强的LAB是目前多糖产业发展的主要方向。EPS的本菌研究株，从利东用北生酸理菜发生化酵试液验中分、形离态得到一学观察株及高16S

产

rDNA段分离纯序列化分析EPS，鉴定，探究其种其抗氧化属地位性。并质利，为用该生物EPS化学的手分离纯化奠定基础，为益生元特性研究提供参考。11.1材料与方法

酸材料

菜发酵液：收集自哈尔滨农家自制酸菜。细菌

基因组DNA提取试剂盒（M2023）、质粒小量提取试剂盒TIANGAN（M1603）、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（L9014）1.2MRS培养基

股份有限公司。：牛培养基（100mL）：葡萄糖2g、胰蛋白胨1g、

0.5肉g，膏柠檬1g，酵酸母铵提取0.2g物，MgSO0.5g，K7H2HPO42O0.0580.2gg，，无水乙4酸H钠0.025g吐温-800.1mL，用于·4供试菌活化及MnSO种子·液制2O

备；产糖培养基（MRS-S）：用蔗糖代替MRS培养基中的1.3葡萄SM20仪器设备

糖。司；BX43生物利用显体微视镜镜：奥：长沙林巴斯市（秋龙深圳仪器设备）工业有限有公限司公

；

UV-2600元素分析仪紫外：可德见国分Elementar光光度计：公日本司。

岛津公司；varioEL

1.4.11.4芋方取酸产法

菜发EPSLAB酵液的样分品，离

根据稀释倒平板法[2]将稀释

液分别涂布于含CaCO100养48mLh。MRS-S挑取单产个糖具有典3的MRS平板上，30益倒置培

型溶钙圈菌落接种于30mL/

1.4.2定EPS观察高含产量高EPS，筛选产EPSLAB得到高培养中菌的株鉴定

EPS，30LAB益，。

静置培养36h，测

的菌落形态特征和菌体形态

特征。根据蔡妙英常见细菌系统鉴定手册[13]分类鉴定及试验方法测定高产胞外多糖菌株的生理生化特性，包括葡萄糖产酸产气试验、

过氧化氢酶试验、氧化酶试验、明胶液化试验、脲酶及酯酶试验、精氨酸水解试验、淀粉水解试验以及糖发酵试验。

利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取高产胞外多糖菌株基因组DNA，以P1：5'AGAGTTTGATCMACTTGG分序TCTC列3'扩为AG增引。物3'[14]；P2，按：5'照TACDu等GGY[2]方法TAC进行CTT16SGTTrDNAACG部DNA回收试剂盒PCR回收产目物的经片段1.0并%琼进脂行测凝胶序。电泳后，用

1.4.3根EPS据Du的等提取[15]的及方纯法化

，取发酵液300mL，4益4000伊g

离心40min。上清液中加入3倍体积预冷的95%乙250醇，沉10%mL淀三氯超过乙纯夜酸水，4，30益充益耀12分搅拌40000益伊溶g离4益解心静置多糖4010沉min淀h，，收4加入集沉益12250淀，000mL用

离心40min，向上清液中加入3倍体积预冷的95%乙伊g

醇，沉淀过夜，4益12000伊g离心40min收集多糖沉淀，重溶于超纯水中，装入透析袋（截留分子量14000Da）EPS中，4益透析2d，每8h时换一次水。将透析得到的

纯化样。品，上样后利用，用Sephadex流速为G-1001mL/min凝胶的过去滤离层子析进水在室一步温下进行洗脱，每5min收集一管，用苯酚-硫酸法测定EPS糖含纯量品。

，合并含有糖的试管，冷冻干燥处理24h得到

将上述得到的纯多糖配制成1mg/mL的多糖溶液，利用紫外可见分光光度计进行波长扫描，扫描范1.4.4围为190元素组成nm耀350分nm析

，检测多糖样品的纯度。

利用元素分析仪测定纯多糖样品中碳元素、氢元

素、氮元素及硫元素含量。根据样品量、热导检测器信号和标准曲线，计算样品中的元素含量。

基础研究

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

1.4.5利总用糖苯、酚蛋硫白酸质法、糖测定总醛酸含糖量含的量测定

[16]；利用Bradford蛋

白质染料结合法测定蛋白质含量[17]；利用硫酸-咔唑法测定1.4.6糖醛1.4.6.1抗氧化酸含量[18]。取不同总还浓度原活力测定

性测定的多糖溶液1mL与2.5mL铁

溶液、2.5mL磷酸盐缓冲液，50益反应20min，之后加4入2.5mL三氯乙酸（trichloroethanoicacid，TCA）溶液，

溶000液、伊2.5g离mL心去30离min子。水取混匀2.5，mL反应上10清液min与后0.5，测定mLFeCl反应3体系的OD700nm值。以VC为阳性对照[19]1.4.6.2取不同DPPH浓度·清除的多能糖力测定

。溶液2mL与2mLDPPH-乙醇溶液混匀，暗反应30min，测定混合液的吸光值OD517nm。以VC为阳性对照[20]DPPH·清除活。根据公式1计算样品清除性：

的率/%=[1-（A式中：A1-A2）/A0]伊100

（1）

反应后的吸光0为以水为对照的吸光值；A值；A1为与DPPH·

替DPPH溶液，排除2为样品溶液的吸光值，即以水代

1.4.6.31mL羟不同基自浓度由基（样多·品糖OH本身溶）清除吸光度液与能1力测定

对结果的影响。液、1mLFeSO4溶液混匀，再加入1mLmL水H2O杨2酸溶-液乙，37醇溶

益反应40min后，测定OD根据公式2计算样品的羟510基自nm值。以V由基清除C为阳性对照[21]。

能力：

清除率/%=[1-（A式中：A10为以水为对照的-吸A2）/A光值0]伊；100

A1为与·OH（2反

）

应1.4.6.4后的吸1mL超光氧值不同阴；A离2为以浓度子自水多由代糖基溶（替OH2O2溶液的吸光值。2-液·与）清除3mL能Tris-HCl力测定

液混匀，25益放置20min，之后加入0.3mL邻苯三缓酚冲

溶液混匀，25益反应5min后，加入1mL浓盐酸，测定ODO325nm值。VC为阳性对照[22]。根据公式3计算样品的2-·清除率：

清除率/%=[1-（A式中：A1-A2）/A0]伊100

A1为终（3反

）

应吸0为加入邻苯三酚后的吸光值；1.4.6.5光值H；A2为只加入Tris-HCl缓冲液的吸光值。2O2清除能力测定

磷酸盐0.6缓mL冲液H2混O2与1mL不同浓度多糖溶液、2.4mL

匀，室温反应10min，测定OD以V阳性对照[23]。根据公式4计算样品的230Hnm值。除能C为力：

2O2清

清除率/%=[1-（A1-A2）/A0]伊100

（4）

33

式中：A液代替样品；0为未加样品的吸光值，即以磷酸盐缓冲

A1为加入H2O2溶液后的吸光值；A2为样

1.4.6.6品溶液的匀。向1mLFe吸光值。

2+螯合能力测定

反应体不同系浓度中加入多糖0.2样品，mL与菲啰嗪0.05溶mL液FeCl，剧烈2溶液混

振荡，室温反应10min，加水定容至3mL。测定体系吸光值OD562nm。选取EDTA·2Na为对照[24]。按照公式（5）计算样品的Fe2+螯合能力：

清除率/%=[1-（A式中：A10为未加样品的吸-A光2）/A值，0]伊即100

以去离子水（5代

）

替样品；A1为加入样品溶液后，反应体系的吸光值；A为以水代替菲啰嗪溶液，反应体系的吸光值，排除样2品1.4.6.7吸光度取不同亚的硝影响浓度基（。

多NO糖2-）清除能力测定

NaNO样品置于具塞试管中，加入1mL

2溶液，37益孵化2h，加水至5mL。按标准曲线绘制方法进行测定，根据标准曲线方程计算NaNO除量，并根据公式（6）计算NO2清

清除率/%=[1-（A2-清除能力[25]：

式中：A为未加样品的吸1-A光度2）/A，0]伊即100

以水代替待（测

6）

样品；A为加入样0品溶液后，反应体系的吸光值；A以水代替1NaNO2为

品2溶液时，反应体系的吸光值，排除样

1.5吸光度每数个据的试处影响验处理

。理均设置3个重复，数据以均值依标

比JMP准差较（形，Version式表示并用Sigmaplot9.0.2，统，计SAS检验（Version，Inc的）显软件著水平设定为0.05。利用

10.0进，Systat行方差Software分析及多，Inc重

）软件绘图。2

2.1结果与分析

本高研究产EPS从LAB酸菜发的分酵离液与中鉴定

LAB，其中GX-1、GX-2、GX-3和共GX-4分离得四到株菌4株可典以明型

显产生EPS且菌株GX-3EPS含量高于其它3株菌，

达到（38.42依2.15）g/L。此外，该菌株产生的EPS含量显

著高于W.confuseKR780676EPS（17.2g/L）[26]

和Leu.citreumEPS的潜SK24.002力。菌株EPSGX-3（2.4g/L在）[27]MRS，具有培养基工业上大菌规落模生为产

色，表面光滑，凸起，不白

MRS-S泽，附着培黏养基性液上体菌。落该较透菌大明株革兰氏为，乳近白圆染色色形，，表边缘阳面性光整，菌滑齐体，。在有呈光

串珠状，无鞭毛，不运动，不产芽孢。生理生化试验以及

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

基础研究

34

部分糖发酵试验结果如表1所示。

表1菌株GX-3生理生化试验检测结果

Table1DifferentialphenotypiccharacteristicsofstrainGX-3检测项目结果检测项目结果检测项目结果葡萄糖+蔗糖+酯酶-果糖+棉子糖-脲酶-半乳糖+阿拉伯糖-明胶液化-核糖+木糖+精氨酸水解-甘露醇+鼠李糖+淀粉水解-麦芽糖+葡萄糖产酸-氧化酶试验-山梨醇

+

葡萄糖产气

-过氧化氢酶试验

-

注：+表示呈阳性。-表示呈阴性。

由表1可知，菌株GX-3能以葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、甘露醇、麦芽糖、山梨醇、蔗糖、棉子糖、阿拉伯糖为底物进行发酵，而不能以木糖、鼠李糖为底物进行发酵；且能够利用葡萄糖产酸产气，脲酶及酯酶试验、明胶液化、精氨酸水解试验、淀粉水解、氧化酶试验、过氧化氢酶试验呈阴性。其结果与Leu.pseu原domesenteroides为132116S生理生化特性基本一致。

bprDNA，与序该列序分列析相表明似性，菌较高的株GX-3相关部菌分株序列均长

为Leuconostoc细菌。

菌株GX-3系统发育树如图1所示。84Leu.GX-3

pseudomesenteroidesstrainDPR-5（MH496653.1）

Leu.Leu.pseudomesenteroidesstrainstrain607（LC223100.1Leu.pseudomesenteroidesLeu.pseudomesenteroidesstrainB10Leu.pseudomesenteroidesstrainL12001（LC094436.1）（）Leu.pseudomesenteroidespseudomesenteroides

strainCCMMB1109KT952379.1）strainCCMMB1078（KF879157.1）L8（JQ801727.1（KF879137.1）

）Leu.Leu.pseudomesenteroidespseudomesenteroidesstrainstrainNi1324Ni1383（（AB5973.1AB5984.1）

）

0.20

图1菌株GX-3系统发育树

Fig.1ThephylogenetictreeofstrainGX-3

DRP-5由图1可知，该菌株与Leu.pseudomesenteroides

结合GX-3基因生物学序列的特亲缘性和关生系理最生近化，结果相似分性析达，到将99GX-3%。鉴定为Leu.pseudomesenteroides，并命名为Leu.pseu原domesenteroides2.2骤后GX-3EPS的GX-3。，经葡EPS分离纯聚糖经凝胶除化

菌Sephadex体、除蛋白G-100、

乙醇进分一级步沉层淀析等，步样品洗脱图呈现单一对称峰，表明XG5EPS为分子量相200对均nm一组之分间。有波最长大扫的特描结果表明征吸收峰，，XG5为碳EPS水化在合物19的特nm~

征吸收。在260nm和280nm处无紫外吸收峰，说明无核酸和蛋白质污染，纯度较高。

2.3GX-3GX-3EPSEPS的化学C、组成H、N分及析

0.24）%、（7.87依0.02）%、（S2.01元素含依0.11量分）%别和为

（（43.270.31依依1.210.07））%%、（。0.52总糖依0.03、蛋）白%质和

（、糖5.26醛依酸含0.11）量分，蛋%。别白其为质中（含糖90.98量醛高酸依含量高于FlammulinavelutipesEPS[28]于

Lb.helveticusMB2-1EPS-3（0.29%）[29]

，低于HyriopsiscumingiiGX-3HCP-3[19]EPS的抗氧化EPS（9.42活%）性

。

2.4.12.4具有总还还原原力

力的化学物质通过提供氢原子来阻断

过氧化物的形成，从而破坏自由基反应链，最终发挥抗氧化作用。GX-3EPS总还原力见图2。

1.81.51.2*

*

*

*

*

0.90.60.30.0

VGX-3C

EPS0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。图2GX-3EPS总还原力Fig.2GX-3EPSonreducingpower

如图2所示，GX-3EPS和V浓度呈正相关，GX-3EPS的总还原C的总还原力与样品

力始终低于V2.4.2显著高对于DPPHPediococcus·的清除pentosaceus作用

SR2-2EPS[23]。

C，但

EPS清除DPPH对的化由基，能够将其

DPPH学物·是一质类具有较较为稳强定的的自合由成基自清除能力。GX-3

120·的清除作用见图3。

100*

*

*

**

806040200

VGX-3C

EPS

0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。图3GX-3EPS对DPPH·的清除作用Fig.3TheGX-3EPSonDPPH·clearanceability

基础研究

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

如图3所示，GX-3EPS的DPPH·清除率都随着样GX-3品浓度3.EPS的增加而增大，但始终低于VC的清除能力。除DPPH能）力%时。张在发玉5现龙mg/mL时的清除率最大，为（65.34依，等研究当ESP不同种类ESP对DPPH·的清

EPS·的清除率为33.53浓度%~41.92为1.0%mg/mL，时，其对2.4.3对·OH对DPPH是OH·清除低于本研究中活的性清除率[23]·。氧中作最用

为危险而且活性最强的自由

基，可以通过活体免疫作用产生，自由进入细胞膜，导EPS致氧化对·应OH激损伤，尤其是对蛋白质造成破坏[30]。GX-3

120的清除作用见图4。

100*

*

80*

*

*

604020V0

GX-3C

EPS0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。图4GX-3EPS对·OH的清除作用Fig.4TheGX-3EPSon·OHclearanceability

如图4所示。随浓度的增加，GX-3EPS和V清除率呈现先升高后趋于平缓的趋势。当质量C的·OH

浓度达到5.0mg/mL时，二者对·OH的清除率分别达到

78.24依3.52）%（EPS）和（95.56依2.14）%（V对·OH具有明显的清除作用，在C）。崔静等[25]发现EPS6质量浓度为GX-32.0EPSmg/mL对·时，清除率高达91.5%，高于本研究中

2.4.4O2-超·是一种有毒氧阴离OH子（的O清除2-·）自率由。

基清除能力

性的活性氧，可以与大量生物活

性分子发生反应，造成蛋白质、DNA、脂质等的氧化损伤。Huang等[31]曾报道，O2-·清除能力与分子中存在的能够促进O-H键释放氢离子的亲电子成分有关，如酮基、醛基等。GX-3EPS对O2-·的清除作用见图5。如图5所示。，随着GX-3EPS和V清除率呈现先急速升高后保持平稳的趋C浓度的增大，

势，当浓度大于5mg/mL1mg/mL时，时GX-3，清除EPS率提和高V幅度明显减小，在浓度为C对O2-·的清除率达到最大，分别为（95.44依4.21）%和（77.48依2.45）%。戚跃明10等[32]mg/mL等研究时，OEPS对O2-·清除能力发现，在浓度为2-·清除率达到47.4%，显著低于本研究

12035

100**

*

*

*

80604020V0

GX-3C

EPS0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。图5GX-3EPS对O2-·的清除作用Fig.5TheGX-3EPSonO2-·clearanceability

中EPS的对EPSO清除效率（P<0.05）。由此可以看出，GX-3

2-·具有一定的清除活性，其作为添加剂可以

降低2.4.5机体HHO的损伤程度。22清除能力

细胞2O2是细胞衰老的诱导因子之一，能够通过细胞

膜，与中的Fe2+或是O2-·作用生成·OH，缓慢地氧化机体，对机体造成氧化损伤[33]。GX-3EPS对H作用见图6。

2O2的清除12010080*

*

*

*

*

6040200

VGX-3C

EPS0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。

图6GX-3EPS对H2O2的清除作用Fig.6TheGX-3EPSonH2O2clearanceability

如图6所示，GX-3EPS的H清除能力随着样

品浓度的增加而增大，当样品浓度2为O25mg/mL时，清除

率为（82.78依3.76）%，显著高于紫枝GSP2EPS的H清除2.4.6能力Fe（48.12%）[32]

。

2O2

2+螯合能力

铜、铁等金属离子参与机体内许多氧化反应，导致

机体氧化损伤[19]。GX-3EPS对Fe2+的螯合能力见图7。

由图7可知，随着样品浓度的升高，Fe2+螯合能力Fe呈现先快速上升后保持平稳的趋势，且GX-3EPS的

2+螯合能力低于EDTA-2Na的Fe2+螯合能力差异不显著（P<0.05）。GX-3EPS在浓度为1mg/mL的Fe2+螯合能力达到（92.37依2.34）%，显著高于Lb.graminis

（36

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

基础研究

120100806040200

0

1

2

3

EDTA-2Na

GX-3EPS4

5

Leu.pseudomesenteroides，并命名为Leu.pseudomesen原teroidesGX-3。以该菌株为供试菌株，进行EPS分离纯·、GX-3EPS具有较高的还原力，对DPPH·、OH、O2-·化，得到高纯度EPS，其产量为（38.42依2.15）g/L。此外，

浓度的增加而增强，最高分别为（65.34依3.）%、（78.24依3.52）%、（77.48依2.45）%、（82.78依3.76）%和（38.34依3.28）%。因此，Leu.pseudomesenteroidesGX-3和NO2-均具有良好的抗氧化活性，H2O2、清除效率随着

样品浓度（/mg/mL）

图7GX-3EPS对Fe2+的螯合能力Fig.7TheGX-3EPSonFe2+

chelatingability

等SR12-1曾发现EPS[23]和EnterococcusfaeciumBDU7EPS[34]。Ker

EPS的金属螯合能力与其分子质量有关，且多糖分子的结构、组成及羟基的数量和位置也影响了螯S-合EPS、-O-能力、-COOH，具有螯、合能力的多糖必须含有-OH、C=O、-2.4.7可能具有高亚NO2

-清除能分-O-力

子质等量及官能高团分。因枝此度可的以结看构出[35]

。

，GX-3盐是一种剧毒物质，也是一种致癌物，在

胃部酸性条件下可转变成的亚。亚可与胺类物质反应，生成具有强致癌作用的亚硝基胺类化合物，诱发人消化道癌等疾病[36]。GX-3EPS对NO的清

除作用见图8。

2-12010080*****6040200

VGX-3C

EPS

0

1

样品浓度2

（/mg/mL3

）

4

5

*表示样品间差异显著（P<0.05）。

图8GX-3EPS对NO2-的清除作用Fig.8TheGX-3EPSonNO2-clearanceability

由图8可知，GX-3EPS具有较高的亚盐清除能3.28力0.63），在）%质量浓度为5mg/mL时，清除率为（38.34依%），]显[23]，著但高与于VCPediococcus相比，GX-3sp.EPSSR2-1的NOEPS[（9.35依。2-清除能力较低3结论

本研究筛选得到一株高产EPS的LAB，经生理生化试验、形态学鉴定和分子生物学试验鉴定该菌株为

发酵得到的EPS作为天然抗氧化剂具有良好的应用和开发前景。参考文献：

[1]

YANGcharacterizationYF,FENGF,ZHOUQQ,etal.Isolation,Purification,andCitreumN21fromofdriedexopolysaccharidemilkcake[J].TransactionsproducedbyofTianjinLeuconostocUni原[2]DUversity,2018,4:1-8

fermentationRP,XINGHW,ZHOUZJ,etal.Isolation,mesenteroidesoptimisationDRP105fromofglucansucrase-producingcharacterisationand

sauerkrautwithimprovedLeuconostocpreservationstability[J].InternationalJournalofFoodScience&Technology,[3]

YANG2017,52(12):2522-2530

characterizationYF,FENGpseudomesenteroidesofF,exopolysaccharideZHOUQQ,etal.YF32fromsoybeanproducedIsolation,paste[J].bypurificationInternationalLeuconostocand[4]ZHOUJournalproducedQofQ,BiologicalbyFENGLeuconostocF,Macromolecules,YANGpseudomesenteroidesYF,etal.2018,Characterization114:529-535XG5fromofhomemade

adextran

wine[J].[5]YANG107:2234-2241InternationalJournalofBiologicalMacromolecules,2018,ofdextranYP,PENGproducedQ,GUObyYLeuconostocY,etal.Isolationcitreumandcharacterization

manchuriansauerkraut[J].CarbohydratePolymers,2015,NM105133:365-from

[6]

372

SARAVANANexopolysaccharideC,SHETTYidlibatter[J].InternationalfromLeuconostocPKH.IsolationJournallactisandcharacterizationof

ofBiologicalKC117496Macromolecules,isolatedfrom[7]2016,TIAN90:ofYT,100-106

ZHAOYT,ZENGHantitumoranovelymers,activityneutralthroughpolysaccharideL,etal.Structuralcharacterization

inducingfromapoptosis[J].LentinusCarbohydrategiganteusandits[8]

IBARBURU2016,1:partialcharacterizationI,PUERTAS231-240

Pol-ofexopolysaccharidesAI,BERREGII,etproducedal.Productionbytwoand

tobacillussuebicusstrainsisolatedfromcider[J].InternationalJourLac原原

[9]

冯nalFoodMicrobiology,2015,214:-62

粗小多婉糖的,夏活永性军研究,王[J].光强食品科学,等.产胞,2016,外多糖37(13):植物乳125-129杆菌的筛选及[10]乳曹永化特强性,张[J].健食品科学,赵雯,等,.2016,植物乳37(17):杆菌胞7-13外多糖的分离纯化及其

基础研究

等：叶广彬，假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

[11]赵酸丹菜代谢,杜仁物鹏比,王较与品瑶,等质.评副价干[J].酪乳食品科学杆菌HD1.7,2017,发38(10):酵酸菜6-11与商品

[12]杜育仁分鹏析,[J].赵丹中,国食品学王晓宇,等报.,12017,株乳17(9):酸高产243-250

菌的分离鉴定与系统发

[13]东2001

秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京:科学出版社,[14]张鉴定书光[J].,微张生物学云娟,代杂志卫东,2012,,等.Viili32(3):乳47-52

制品中干酪乳杆菌的分离

[15]DUandRteroidesstructuralP,XINGHW,YANGYP,etal.Optimization,purification

isolatedcharacterizationfromChineseofsauerkrautadextran[J].producedCarbohydratebyL.mesenPoly原原[16]mers,methodDUBOIS2017,forM,174:determinationGILLES409-416

KA,sugarsHAMILTONandrelatedJK,substances[J].etal.Colorimetric

lyticalChemistry,1956,28(3):of350-356

Ana原

[17]LAEMMLIoftheheadUofK.bacteriophageCleavageofstructuralT4[J].Nature,proteins1970,during227(5259):theassembly

680-[18]685

BITTERtion[J].AnalyticalT,MUIRBiochemistry,HM.Amodified1962,4(4):uronic330-334

acidcarbazolereac原[19]XINGmationHW,DURP,ZHAOFK,etal.Optimization,chainconfor原

LeuconostocandmesenteroidescharacterizationDRP105[J].ofexopolysaccharideInternationalJournalisolatedoffromBi原[20]ologicalSHENcessSMacromolecules,A,CHENDJ,LI2018,X,et112:al.Optimization1208-1216ofextractionpro原

polyphyllaandantioxidant[J].CarbohydrateactivityPolymers,ofpolysaccharides2014,104:from80-86

leavesofParis[21]LIUdantY,DUYQ,WANGJH,etal.StructuralInternationalactivitiesJournalofpolysaccharideanalysisandantioxi原

ofBiologicalisolatedMacromolecules,fromJinqian2014,mushroom[J].:63-[22]68

polysaccharidesCHENYX,LIUobtainedXY,XIAOfromChlorellaZ,etal.pyrenoidosaAntioxidantviaactivitiesdifferent

of

ethanolmolecules,concentrations[J].2016,91:505-509

InternationalJournalofBiologicalMacro原[23]张特玉性龙研究,胡[J].萍中,王金国酿龙造,,等2015,.产胞34(10):外多糖37-42

乳酸菌的筛选及抗氧化

[24]LIUzationCH,andtheandWANGskinantioxidantCH,XUZL,etal.Isolation,chemicalcharacteri原

ofAloebarbadensisactivitiesofMillertwopolysaccharidesirrigatedwithseafromwater[J].thegelProcessBiochemistry,,孙晓萌,等2007,.海42(6):参肠道961-97037

[25]性崔[J].静,大李连成工业大学学报,2016(2):酵84-87

母菌产胞外多糖的抗氧化[26]ROSCAdextranI,byPETROVICIWeissellaconfusaAR,PEPTANARIUanditsInvitroD,functionaletal.Biosynthesischaracterisof

tics[J].InternationalJournalofBiologicalMacromolecules,2018,原

[27]MIAO107:1765-1772

solubleM,polysaccharideBAIA,JIANGfromB,etal.LeuconostocCharacterisationcitreumofSK24.anovel002water-FoodHydrocolloids,2014,36:265-272[J].

[28]MAdantZ,velutipesactivityCUIF,SF-06[J].andGAOanti-agingX,etal.Purification,characterization,antioxi原

AntonieVanofexopolysaccharidesLeeuwenhoek,2015,by107(1):Flammulina73-[29]82

LIbacillusW,JIJ,helveticusRUIX,etMB2al.Production-1anditsofexopolysaccharidesfunctionalcharacteristicsbyLactoin原

[30]vitro[J].LINExtractionL,XIELWT-Foodoptimization,J,LIUS,Scienceetal.physicochemicalPolysaccharideandTechnology,characterizationsfrom2014,Mesona59(2):chinensis732-739

andan原

:

tioxidant[31]ecules,HUANG2017,activities[J].99:665-673

InternationalJournalofBiologicalMacromol-saccharidesS-Q,fromDINGInonotusS,FANobliquusL.Antioxidantactivitiesoffivepoly-[32]logical戚Macromolecules,陈涛.紫芝胞外2012,多糖50(5):[J].分离纯1183-1187InternationalJournalofBio原品工跃业明科技,,2013,34(4):105-113

化及抗氧化性的研究[J].食[33]YILDIRIMandA,MAVI[34]ofABDHULAgricultureantimicrobialandactivitiesA,KARAFoodChemistry,ofRumexAA.Determinationofantioxidant

2001,crispus49(8):L.extracts[J].JournaldantactivityK,GANESHofexopolysaccharideM,SHANMUGHAPRIYA4083-40

fromprobioticS,strainetal.EnterococAntioxi原

cusfaecium(BDU7)fromNgari[J].InternationalJournalofBiologi原原

[35]calLIUMacromolecules,exopolysaccharidesJ,LUOJ,YEH,2014,frometal.endophyticIn70:vitro450-4

andbacteriuminvivoantioxidantPaenibacillusactivityof

myxaEJS-3[J].CarbohydratePolymers,2010,82(4):1278-1283

poly-

[36]KAVOOSIscavengingG,andAMIRGHOFRANanti-oxidantcapacityZ.ChemicalofOcimumcomposition,Basilicumradical

tialoil[J].JournalofEssentialOilResearch,2017,29(2):1-199

essen原

收稿日期：2018-07-13