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大肠杆菌培养实验报告

篇一：大肠杆菌检测实验报告

国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数 实验目的

实验原理：国标法操作的原理 实验器材：

培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台 实验药品：

磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤： 一：

10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。

用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min 二：

1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。

3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。 4：灭完菌后放入超净台中备用。 三：

1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。 3：取4只试管，编号1—4

4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS

5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀

7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。 9：取4只平皿，编号1—4

10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；

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待培养基冷凝后倒置。

11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。

12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。 四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照） 1号，2号菌落个数多不可计，舍弃 4号平皿中菌落数目小于10 cfu ，舍弃

3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个 cfu 。 计算样品中细菌浓度为：1.05 × 105 Cfu/ml 点评

超净台中的实验步骤讲述详细，明确，不错。前面的步骤叙述有点乱，建议按照如下标题重新调整顺序。 实验步骤： 1、 仪器清洗

将烧杯，培养皿、试管等仪器用洗衣粉清洗，超声5min.然后用清水清洗，超声5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。 2、 培养基配制

精确称量。。。。。。。。。。放入锥形瓶中，加入。。。。mL蒸馏水，摇匀 3，灭菌

包扎、灭菌，烘干备用 3、 超净台中的操作（如上）

除了实验步骤和结果，还要有讨论和注意事项 例如：实验讨论：

1、 评价该方法（操作简易程度，灵敏度如何，适用性） 2、 为何选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数？ 注意事项

比如各种仪器的使用注意事项，以及保持洁净，防止染菌等。 篇二：微生物生理生化实验报告

实验十 一IMViC与硫化氢试验 指导教师：李海花 周六 第三组

学号：06012XX041 姓名：宋天佳 专业：XX级水产养殖 学号：03021XX025姓名：皇 昊 专业：XX级化学1班 学号：06012XX055 姓名：续鹏辉 专业：XX级水产养殖 一、实验目的

了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 2、实验原理

IMViC是I－吲哚（indol test）、M－甲基红（methyl red test）、V－伏-普（Voges-Prolauer test）和C－柠檬酸盐（citrate test）4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气

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杆菌与大肠杆菌，多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水时若超过一 定指标，则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水是要将 两者分开。硫化氢（H2S）实验也是检查肠道细菌的生化实验。 （一）吲哚试验（indol test）

吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生，有些细菌分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色。 色氨酸＋H2O色氨酸酶 吲哚＋NH3＋丙酮酸 吲哚+ 对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚（红色）

只有部分细菌能产生色氨酸酶，从而具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚实验可 以作为一个生化检测指标。大肠杆菌产色氨酸酶实验结果为阳性（红色），产气肠杆菌不产色氨酸酶实验结果为阴性（无色）。 （二）M-甲基红试验（methyl red test）

用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。细菌代谢糖产生酸使培养 基变酸（pH下降），使甲基红指示剂变色：橘黄色（pH6.3红色（pH4.2）

尽管，所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别： 两者在培养早期产生有机酸，但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4，而产气肠杆菌则将有

机酸转化为非酸性产物，使pH上升至6左右。因此，大肠杆菌为阳性（红色），产气肠杆

菌阴性（黄色）。

（三）伏-普实验（Voges-Prolauer test）

测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物（如丙酮酸）的能力。丙酮酸进行缩合、 脱羧生成乙酰甲基醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋

白胨中的精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，及伏-普反应阳性，不产生红色化合物者为

反应阴性。碱性条件、加入少量含胍基的化合物可使反应更明显。

大肠杆菌不产丙酮酸实验结果为阴性（无色），产气肠杆菌产丙酮酸实验结果为阳性（红色）。 丙酮酸 乙酰乳酸 乙酰甲基甲醇 胍基+二乙 红色化合物

（四）柠檬酸盐试验（citrate test）

用来检测柠檬酸盐是否被利用，有些细菌以柠檬酸钠为碳源，培养基中的柠檬酸和磷酸 铵被分解后，产生碱性化合物，使pH升高，当加入1％溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基就

会有绿色转变为深蓝色，溴麝香草酚蓝指示范围：pH＜6黄色，pH 6～7绿色，pH ＞7蓝色。大肠杆菌不能利用柠檬酸盐实验结果为阴性（绿色），产气肠杆菌能利用柠檬酸盐实 验结果为阳性（蓝色）。 （五）硫化氢实验

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用来检测硫化氢的产生，也是用于肠道细菌检查的常用生化实验。含硫有机物（如胱 氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分细菌分解产生H2S， H2S和培养基中的铅盐或铁盐

反应，形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀。大肠杆菌不能分解含硫有机物实验结果为阴性（无

沉淀），产气肠杆菌能分解含硫有机物实验结果为阳性（黑色沉淀）。 三、实验器材

1、菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌斜面各一支。

2、培养基 ：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐培养基、盐还原培养

基、醋酸铅培养基

3、溶液和试剂：甲基红指示剂，40％KOH，5％-萘酚溶液，乙醚，吲哚试剂 4、仪器或其他用具： 试管架，接种环等 四、操作步骤 一）实验准备

1.葡萄糖蛋白胨水培养基配制：蛋白胨3g，葡萄糖3g，磷酸氢二钾1.2g，水600ml，溶 解，调节Ph7.，0-7.2，分装于70支试管中，112℃灭菌30min。

2.柠檬酸盐培养基配制：NH4H2PO40.2g，K2HPO4 0.2g，NaCl1g，MgSO4 40mg，柠檬酸钠0.4g，琼脂4g，调节pH6.8，1%溴香草酚蓝乙醇液2ml，水200ml，溶解，分装于20支试管中， 121℃灭菌20min。（pH不宜偏高，以淡绿色为宜）

3. 盐还原培养基配制：蛋白胨1.25g，氯化钠0.625g，钾0.25g，水125ml，溶 解，调节pH7.4左右，分装于16支试管中，121℃灭菌20min。

4.硫化氢试验养基配制：蛋白胨5g，氯化钠1.25g，柠檬酸铁铵125mg，硫代硫酸钠125mg，琼脂5g，水250ml。先将琼脂、蛋白胨融化，冷至60 ℃时加入其他成分，调 pH7.2左右，分装于35支试管中，112℃灭菌20min。 二） 接种与培养

1.穿刺法分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支醋酸铅培养基（H2S），37℃培养48h。 2.分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支蛋白胨水培养基（I）、 2支葡萄糖蛋白胨水培养基（M＆V），37℃培养2d。

3.划S曲线法分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支柠檬酸盐斜面培养基（C），37℃培养2d。

三）结果观察

1.H2S实验：观察是否有黑色硫化铅沉淀产生。

2.吲哚实验：2d后的培养物内加3～4滴乙醚，摇动数次，静至1～3min，待乙醚上升后，沿管壁徐徐滴加2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物者为阳性反应。 3.甲基红实验：2d后的培养物内加2滴甲基红试剂，培养物变为红色者为阳性，黄色者为阴性（注意甲基红不要过量，以免出现假阳性）。

4.伏－普实验： 2d后的培养物内加5～10滴40％KOH，然后加入等量的5％-萘酚溶液，

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用力振荡，红色为阳性。

5.柠檬酸盐实验：观察2d后的培养物上有无细菌产生及其颜色，蓝色为阳性，绿色为阴性。

五、实验结果

将实验结果填入下表。“＋”表示阳性反应，“—”表示阴性反应。 六、讨论

1. 吲哚试验、甲基红试验、伏－普试验、柠檬酸盐试验的实验结果与理论结果一致。H2S试验的实验结果与理论结果不一致，两支醋酸铅培养基中都产生黑色沉淀，均为阳性反应，可能的原因：接种操作时，先穿刺接种产气肠杆菌，之后，接种针未充分加热灭菌，再穿刺接种大肠杆菌时混入部分大肠杆菌；接种针在接种产气肠杆菌时，接种针上不粘上了产气肠杆菌，未被加热灭菌，再接种大肠杆菌时，将产气肠杆菌混入，使大肠杆菌产生假阳性反应。

2. 吲哚试验，实验现象不明显，可能的原因：培养基中的色氨酸含量不够高；吲哚试剂加入的量不够，一部分粘在试管壁上损失掉，之后补加时乙醚已挥发；滴加吲哚试剂时动作不够轻缓，破坏了红色化合物的生成。

3. 为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏—普试验最初底物和最终产物有何异同？

大肠杆菌、产气肠杆菌都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解代谢途径不同。大肠杆菌，可产生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红，即甲基红反应阳性。产气肠杆菌则使丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰，二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即伏-普阳性反应。 4. 说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用,可以用哪种化合物代替醋酸铅？

醋酸铅培养基（试纸）可检验硫化氢的产生，反应为：Pb(Ac)2+H2S=PbS↓+2HAc产生黑色的硫化铅。所以培养基（纸带）变黑为阳性，不变为阴性。 从硫离子的角度讲，银、硫酸铜可产生同样现象。

5. 为什么在细菌吲哚试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂,而不用丙酮酸？ 吲哚比较容易检测，特异性也高，不容易受干扰。丙酮酸则相对难以检测，特异性很低，很多反应都能产生丙酮酸，如葡萄糖酵解的终产物也是丙酮酸。 篇三：多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告

学院：环境科学与工程学院 班级：11级环境科学（2）班 姓名：李宝携学号： 98 实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群 一、实验目的

（1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。 （2）学习检测水中大肠菌群的方法。 2、实验原理

大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在

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37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。 三、实验材料 1、水样 中心湖湖水 2、试剂

三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液 3、仪器及其他用品

试管、发酵管、烧杯、量筒、移液、高压灭菌锅 四、操作过程

1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后， 1支加入9ml自来水。

2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。

3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。 4、 将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。 5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。 6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。 五、实验结果

实验现象：有些试管的颜色变成黄色，并且有些试管中的发酵管的底部存在气泡，说明存在产酸产气的大肠杆菌。 表1—实验数据记录

查表得每升水源的大肠菌群数，并将结果填入表中 表2-水源水样中大肠菌群 六、思考题

1、为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？

答：（1）大肠杆菌与消化道病原菌的来源一致，如果水源中检测出大肠菌落，则说明很大可能存在肠道病原菌。

（2）大肠杆菌具有较强的抗逆性。

（3）大肠杆菌存在的可能性比较大，而肠道病原菌数量少，即使检出为阴性，也很难保证没有病原菌存在。

（4）大(转载自： 小草 范 文 网:大肠杆菌培养实验报告)肠杆菌的特性比较特殊，比较容易检测。 七、实验心得

这次试验比较简单，主要是了解大肠杆菌作为指示菌的特性，产酸产气、和它新城代谢的产物所表现出来的特定现象，即倒扣的发酵管中的气泡和黄色。

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