第３ｌ卷第５期 ２０１２年 １０月 四 川 环 境 Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．５ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１２ ＳＩＣＨＵＡＮ ＥＮＶＩＲＯＮＭＥＮＴ ・试验研究・ 多管发酵法与其改进法检测 水中粪大肠茵群的比较 张济龙 ，何吉明 ，袁泉 ，欧敏。 ６３６０００） （１．巴中市环境监测站，四川巴中６３６０００；２．巴中市农经站，四川巴中摘要：粪大肠茵群是水体中粪便污染的重要指示茵，对于评价水质污染程度具有重要的卫生学意义。多管发酵法是传 统的粪大肠茵群检测方法，但其步骤繁杂、周期长。目前，已有部分监测及科研人员对其进行了改进，笔者采用改进 法与国标多管发酵法进行比较验证，认为Ｅｃ培养法可完全替代国标多管发酵法，纸片法亦可用于除酸性水样及茵量 大的原污水外的其他环境水样中粪大肠茵群的检测。 关键词：水体；粪大肠菌群；检测方法 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１．３６４４（２０１２）０５－０００８－０４ 中图分类号：Ｘ８３２ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒ Ｆｅｃａｌ Ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｕｓｉｎｇ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｌｌｌｔｉ．Ｔｕｂｅ Ｚｙｍｏｌｙｔｉｅ Ｍｅｔｈｏｄ ＺＨＡＮＧ Ｊｉ—ｌｏｎｇ ，ＨＥ Ｊｉ—Ｍｉｎｇ ，ＹＵＡＮ Ｑｕａｎ ，Ｏｕ Ｍｉｎ （１．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆＢａｚｈｏｎｇ Ｃｉｔｙ，Ｂａｚｈｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６３６０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ Ｓｔａｔｏｉｎ ｆＢａｚｏｈｏｎｇ Ｃｉｔｙ，Ｂａｚｈｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６３６０００，Ｃｈｉａ）ｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｅｃａｌ ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ ａｌｅ ｉｍｐｏ￣ａｎｔ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ ｆｅｃｅｓ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｗａｔｅｒ，ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｈｙｇｉｅｎｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｆｏｒ ｗａｔｅｒ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ｍｕｌｔｉ—ｔｕｂｅ ｚｙｍｏｌｙｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｆｅｃａｌ ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ，ｈｏｗｅｖｅｒ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｉｏｄ ｉｓ ｌｏｎｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ，ｉｔ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｓｏｍｅ ｍｏｎｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｂｏｔｈ ｔｈｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｏｎｅ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ ｖｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＥＣ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｕｌｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｒｅｐｌａｃｅ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｕｌｔｉ—ｔｕｂｅ ｚｙｍｏｌｙｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅ ｓｌｉｐ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｏｒｆ ｆｅｃａｌ ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｅｎｖｉｏｎｍｅｎｔｒｌ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌａｅｓ ｅｘｃｅｐｔ ｔｈｅ ａｃｉｄｉｃ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｒａｗ ｓｅｗａｇｅ ｔｌｌ ｌａｒｇｅ ｂａｃｔｅｒｉａ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｗａｔｅｒ；ｆｅｃａｌ ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ 粪大肠菌群是能在４４．５℃－Ｉ－０．５℃温度下生长 的耐热的大肠菌群，其来源于粪便中的细菌，因 此，粪大肠菌群是水体中人畜粪便污染的重要指示 菌，对于评价水质污染程度具有重要的卫生学意义。 目前，多管发酵法是传统的粪大肠菌群检测方 实际效果如何尚需验证。为此，本研究采用改进法 与国标多管发酵法同时检测相同的地表水和废水样 品，并对检测结果进行了分析，以期为找出替代多 管发酵法的简单、快速方法提供依据。 法，具有不受浊度的影响、价格便宜等优点，但该 方法操作步骤繁杂、检测周期长，需要消耗大量的 人力和物力。为此，已有部分监测及科研人员对 ＨＪ／Ｔ３４７－－２００７中多管发酵规范测定法进行了改 进¨ 】，改进法具有简单、快捷、经济的优点，但 １ 材料与方法 １．１材料与试剂 乳糖蛋白胨培养基、ＥＣ培养基；快速检测纸 片（沈阳市疾控中心），水样来至巴中市各县的地 表水和废水。 １．２方法 收稿日期：２０１２－０１—１３ 作者简介：张济龙（１９８３一），男，江西赣州人，２００８年毕业于四川农 业大学土壤学专业，硕士研究生，工程师，研究方向为环 境监测工作。 １．２．１ 多管发酵法及其改进法 （１）国标多管发酵法 。 ５期 张济龙等：多管发酵法与其改进法检测水中粪大肠菌群的比较 ９ （２）ＥＣ培养法 ］：不经过初发酵，把水样直 菌落，周围有黄圈者或出现片状红晕，周围为黄色 者为阳性），根据阳性纸片张数，查ＭＰＮ值表， 报出结果。 接接种于ＥＣ培养液中，在４４．５。【＝水浴中培养２４ ｈ 后，查ＭＰＮ表计数。 （３）蛋白胨培养法 ｊ：将水样接种至乳糖蛋 白胨培养液后，在４４．５￣Ｃ±０．５℃培养箱中培养 ２４ｈ后，查ＭＰＮ表计数。 （４）５管法和１０管法 ．８］：５管法是先将水样 混匀并适当稀释，取稀释后的水样１００、１０、１、 ２ 实验结果与分析 ２．１实验结果 采用改进法和国标多管发酵法对２０个地表水 和废水样品的检测结果见表１，从表１可以看出， ０．１、０．０１ ｍｌ各接种１管；１０管法则是每个样品 用二种不同的水样量接种，每种水样量接种５管， 初发酵和复发酵实验的方法和标准方法相同，查 ＭＰＮ表（与国标方法略有不同）计数。 １．２．２快速纸片法 改进法所得的粪大肠菌群ＭＰＮ值与国标多管发酵 法的检测结果多数不一致，其中ＥＣ培养法、蛋白 胨培养法的检测结果总体上分别呈现略低于和略高 于国标多管发酵法，且ＥＣ培养法、１０管法和纸片 法的检测结果均在国标方法的９５％置信值范围内， 检测结果均可接受。但蛋白胨培养法和５管法的检 接种５张大纸片（纸片的规格是１５ｃｍ× １０ｃｍ），每张接种１０ｍｌ水样；接种１Ｏ张小纸片 （纸片的规格是５ｃｎｌｘ６ａｍ），其中５张各接种ｌｍｌ 水样，另５张接种１：１０稀释水样各１ ｍｌ。置于 ４５℃培养１８—２４ｈ，观察结果（纸片上出现紫红色 测结果在国标方法的９５％置信范围内的样品比例 分别仅为５０％和４０％（表２）。 表１ 改进法与国标方法粪大肠菌群ＭＰＮ结果 Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ＭＰＮ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｆｅｃａｌ ｃｏｉｌｆｏｒｍｓ ｂｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｎｄ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ （个／Ｌ） １０ 四川环境 ３１卷 ２．２ 改进法与国标法相关性分析 数均达到极显著水平，其中１０管法、ＥＣ培养法、 纸片法与国标法的相关系数均在０．９以上，５管法 与国标法的相关系数亦达到０．７８。 从表３可以看出，各改进法与国标法的检测结 果均有一定的相关性，各改进法与国标法的相关系 表３改进法ＭＰＮ与国标法结果相关性分析 Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｎｄ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ＭＰＮ 注：”表示两者关系达到极显著水平（ｐ＜０．Ｏ１） ３分析与讨论 实验结果表明：纸片法、ＥＣ培养法不仅与国 法相关系数仅为０．５７，亦要明显低于文献报道 （ｒ＝Ｏ．８９４）［６３ 。 在３个检测结果可接受的改进法中，ｌ０管法 虽然检测结果与国标多管法基本一致，且接种管数 标法的相关系数高，且检测结果均在国标方法的 ９５％置信范围内，检测结果可接受。ｌ０管法接种２ 个不同水样量各５管，具有较好的代表性，加之其 ＭＰＮ表由国标多管法改编而来，因此所得结果与 国标多管法一致性较好，相关系数亦较高，这些与 文献报道基本一致 。。。５管法由于检测水样接 种管数太少，ＭＰＮ表过于简单，所得结果可接受 有所减少，但仍需进行复发酵实验，且当较大的水 样量的复发酵阳性管数为５管时，还需重新稀释接 种第三个更小的水样量，操作步骤更加繁杂，因此 不宜作为国标多管法的替代方法。 纸片法虽省时省力、简便易行，１８～２４ｈ培养 即可报出结果，但在样品粪大肠菌群量多时，大量 的乳糖分解会抑制酶的活性，无法还原ｒ丌Ｃ（红四 率较低，这与前人研究结果有较大差别 。蛋白 胨培养法检测结果大多不可接受，与国标多管发酵 ５期 张济龙等：多管发酵法与其改进法检测水中粪大肠菌群的比较 １ｌ 碳唑），而不能形成红色斑点或红晕，致使纸片呈 黄色。酸性水样亦会使纸片采样后变黄色。在这两 测方法研究初探［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１０，２ｏ（８）：２０９１－ ２Ｏ９２． 种情况下需改用传统的发酵法做验证试验，以避免 误判。因此，纸片法对于酸性水样及菌量大的原污 ［３］ 董雪，任羽光，韩桂春，等．纸片快速法监测地表水中粪大 肠菌群的探讨［Ｊ］．环境与健康杂志，２００３，２０（２）：１１９—１２０． ［４］ ＨＪ／Ｔ ３４７－２００７，水质粪大肠菌群的测定滤膜法和多管发酵法 水不适用。 ＥＣ培养法由于是直接接种水样于ＥＣ培养液 中进行复发酵实验，仅需一步，可在２４ｈ内报出检 测结果，大幅节省了人力和时间，且该法与国标多 ［Ｓ］． ［５］ 吕琦，陈之江．快速测定地表水中粪大肠菌群．环境监测 管理与技术［Ｊ］，２００３，１５（６）：３７． ［６］ 冯青英，刘娟，杨大卫．粪大肠菌群多管发酵测定法的改 管法验证粪大肠菌群阳性的方法一致，该法可完全 进研究［Ｊ］．中国环境监测，２００９，２５（６）：４３－４６． 替代国标多管法，适用于地表水、地下水和废水中 粪大肠菌群的检测。 参考文献： ［１］ 阚方琦，马乐好，权立敏．粪大肠菌群快检试纸的研制及其 效果观察［Ｊ］．中国消毒学杂志，２００７，２４（３）：２２９－２３１． ［２］ 潘力军，高新岗，王友斌．医疗机构污水粪大肠菌群快速检 ［７］ 谢嵘．五管发酵测定粪大肠菌群的研究［Ｊ］．干旱环境监 测，２００４，１８（３）：１９１－１９２． ［８］ 谢嵘．十管发酵测定粪大肠茵群的研究［Ｊ］．黑龙江环境 通报，２００９，３３（４）：３７－３９． ［９］ 韩桂春．生活污水中粪大肠菌群快速监测方法一纸片法 ［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００３，１３（４）：４７５－４７６． ［１Ｏ］ 赵凌宇．粪大肠菌群快速测定——纸片法的应用［Ｊ］．环境 监测管理与技术，２００７，１９（４）：１８－２０．
