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三氯乙酸沉淀法

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三氯乙酸沉淀法?

答:三氯乙酸沉淀法是一种常用的蛋白质提取和纯化方法。通过加入适量浓度的三氯乙酸,可以使细胞或组织中的蛋白质凝聚成沉淀物,从而方便后续的蛋白质分离和纯化工作。

具体步骤如下:

1.取适量样品粉末,按20μL/mg的比例加入蛋白裂解液( 9 mol/ L尿素, 4% CHAPS,1%IPG缓冲液, 1%DTT , 35 mmol/ L Tris),30℃水浴1 h,并不时振荡。

2.12000×g下离心10 min,上清液中加入4倍体积的预冷丙酮,于- 20℃下放置至少2 h,4 000×g下离心10min,沉淀用水化缓冲液( 8 mol/ L尿素, 2% CHAPS, 20mmol/ L DTT, 0. 5%IPG缓冲液)溶解,重复该步骤1~ 2遍。样品溶液存于- 75℃下或直接用于电泳。

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