浙江中西医结合杂志２０１４年第２４卷第９期Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＪＩＴＣＷＭ（Ｖｏ１．２４ Ｎｏ．９ ２０１４） ７５７ 茶多酚和黄芩苷对百草枯中毒大鼠血清及 肺组织ＴＧＦ一１３１和ＨＩＦ—ｌｏＬ表达的影响 徐丽倩 李 江 李璐璐 李剑平。刘晓璐 何 勇－邓丹凤 裘云庆， １浙江大学医学院附属第一医院杭州３ １０００３ ２河南省人民医院 ３浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室 摘要 目的观察茶多酚（ＴＰ）、黄芩苷（ｂａｉｃａｌｉｎ）对急性百草枯中毒大鼠血清及肺组织ＴＧＦ一１３１、 ＨＩＦ—ｌｅｔ表达的影响。方法９０只健康ＳＤ大鼠随机分为空白对照组（Ｎ组）、急性百草枯中毒组（Ｐ 组）、茶多酚干预组（Ｔ组）、黄芩苷干预组（Ｓ组）及茶多酚加黄芩苷干预组（Ｌ组），每组ｌ８只，各组 再按随机原则分为１、７和１４天三个亚组，每个亚组６只。Ｐ、Ｔ、Ｓ、Ｌ各组大鼠均予５０ｍｇ／ｋｇ一次性 腹腔注射染毒；大鼠染毒６ｈ后Ｔ组给予茶多酚２５０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）、Ｓ组予黄芩苷８０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）Ｌ组给予 茶多酚加黄芩苷混悬液灌胃干预，Ｎ组和Ｐ组均给予用等量生理盐水灌胃。在第１、７和ｌ４天随机 处死大鼠，腹主动脉采血，采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｅｔ水平，免疫组化 染色检测大鼠肺组织ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｅｔ表达量。结果经百草枯染毒后，Ｐ组大鼠血清及肺组织各 时点ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｅｔ含量均高于Ｎ组（Ｐ均＜Ｏ．０５）。经药物干预后，Ｔ、Ｓ、Ｌ组大鼠血清ＴＧＦ一１３１、 ＨＩＦ—ｌ ０【水平在第７天和第ｌ４天时较Ｐ组显著降低（Ｐ均＜Ｏ．Ｏ５）；Ｓ组在第１４天时，Ｔ组与Ｌ组第７ 天和第１４天时大鼠肺组织ＴＧＦ—Ｂ１、ＨＩＦ—ｌｅｔ表达均较Ｐ组显著降低（Ｐ＜０．０５）。各药物干预组各时 点ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｔ表达量比较，差异无统计学意义（ｅＰ＞Ｏ．０５）。结论毒大鼠血清及肺组织ＴＧＦ—Ｂｌ、ＨＩＦ—ｌ仅表达有下调作用。 茶多酚、黄芩苷对急性ＰＱ中 关键词大鼠；百草枯中毒；茶多酚；黄芩苷；ＴＧＦ—Ｂ１；ＨＩＦ—ｌｔｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｔｅａ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ａｎｄ Ｂａｉｃａｌｉｎ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－［３１ ａｎｄ ＨＩＦ－ｌｏｔ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｐａｒａｑｕａｔ Ｐｏｉｓｏｎｅｄ Ｒａｔｓ ＸＵ Ｌｉｑｉａｎ ，ＬＩ Ｊｉａｎｇ２，ＬＩ Ｌｕｌｕ ，ＬＩ Ｊｉａｎｐｉｎｇ ，ＬＩＵ Ｘｉａｏｌｕ ，ＨＥ Ｙｏｎｇ ，ＤＥＮＧ Ｄａｎｆｅｎｇ ，ＱＩＵ Ｙｕｎｑｉｎｇ Ｊ．Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ（３１０００３），Ｃｈｉｎａ，＂２．Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ Ｈｏｓｐｉｔｌａ；３．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒｔａｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｆｉｒｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ． ｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔｌａ，Ｚｈｅｊｉｎｇ ａＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ（ＴＰ）ａｎｄ ｂａｉｃａｌｉｎ ｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １３１（ＴＧＦ－１３１）ａｎｄ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｌｅｔ（ＨＩＦ－Ｉｏｔ）ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ｐａｒａｑｕａｔ ｐｏｉｓｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎｉｎｅｔｙ ｈｅａｌｔｈｙ Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄｒａｗｌｅｙ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１８），ｐａｒａｑｕａｔ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１８）， ｐａｒａｑｕａｔ＋ＴＰ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ ＴＰ，ｎ＝１８），ｐａｒａｑｕａｔ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ ｂａｉｃａｌｉｎ，ｎ＝１８）ａｎｄ ｐａｒａｑｕａｔ＋ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐ （ｇｒｏｕｐ ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ，ｎ＝１８）．Ｅｘｃｅｐｔ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ２０％ ｐａｒａｑｕａｔ（５０ｍｇ／ｋｇ）ａｔ ａ ｔｉｍｅ，ａｎｄ ａｔ ６ ｈ ａｆｔｅｒ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，ＴＰ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ＴＰ ａｔ ２５０ｍｇ／（ｋｇ。ｄ），ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｂａｉｃａｌｉｎ ａｔ ８０ｍｇ］（ｋｇ‘ｄ），ａｎｄ ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ＴＰ ａｎｄ ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｌｙ，ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｐａｒａｑｕａｔ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ ｏｎ ｔｈｅ １ｓｔ，７ｔｈ，ａｎｄ １４ｔｈ ｄａｙ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒｔａ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＧＦ－Ｄ１ ａｎｄ ＨＩＦ－ｌａ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅ ｌｕｎｇｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｆｏｒ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－１３１ ａｎｄ ＨＩＦ一１ｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｓ Ｃｏｒｔｎ— ｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＧＦ－１３１ ａｎｄ ＨＩＦ－ｌｏ￣ｉｎ ｐａｒａｑｕａｔ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５） ｂｏｔｈ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅ．Ａｆｔｅｒ ｄｒｕｇ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｓｅｕｍ ｌｒｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＧＦ一１３１ ａｎｄ ＨＩＦ一１ ０【ｉｎ ＴＰ，ｂａｉｃａｌｉｎ，ａｎｄ 基金项目：浙江省中医药重点研究计划资助项目（Ｎｏ．２０１１ＺＺＯ０８） 通讯作者：裘云庆，Ｅ－ｍａｉｈｑｉｕｙｑ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ａｎ ７５８ 浙江中西医结合杂志２０１４年第２４卷第９期Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＪＩＴｃｗＭ（Ｖｏ１．２４ Ｎｏ．９ ２０１４） ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｐａｒａｑｕａｔ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）ｏｎ ｔｈｅ ７ｔｈ ａｎｄ １４ｔｈ ｄａｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｒａｑｕａｔ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－［３１ ａｎｄ ＨＩＦ－ｌｏｔ ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＴＰ ａｎｄ ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐｓ ｏｎ ７ｔｈ ｄａｙ ａｎｄ １４ｔｈ ｄａｙ ａｎｄ ｉｎ ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐ ｏｎ １４ｔｈ ｄａｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｆ０ｕｎｄ ａｍｏｎｇ ＴＰ，ｂａｉｃａｌｉｎ，ａｎｄ ＴＰ＋ｂａｉｃａｌｉｎ ｇｒｏｕｐｓ ａｔ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔ（ａｌｌ Ｐ＞Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＰ ａｎｄ ｂａｉｃａｌｉｎ ｃａｎ ｄｏｗｎ——ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＧＦ——１３１ ａｎｄ ＨＩＦ——ｌ（ｘ ｂｏｔｈ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｐｏｉｓｏｎｅｄ ｂｙ ｐａｒａｑｕａｔ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ ｒａｔｓ；ｐａｒａｑｕａｔ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ；ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ；ｂａｉｃａｌｉｎ；ＴＧＦ一１３１；ＨＩＦ—ｈｘ 百草枯（ｐａｒａｑｕａｔ，ＰＱ）又名对草快、克芜踪，化学 １．２ 实验材料茶多酚粉剂及黄芩苷粉剂购自上海 名１－１一二甲基一４—４一联吡啶阳离子盐，是一种非选 择性、接触性除草剂，对人体毒性强，病死率高，口服 百草枯中毒后除引起消化道糜烂、出血外，可致肺、 肾 肝等多脏器功能障碍综合征；其特征性的中毒改 变为肺组织，早期肺部表现为肺泡上皮细胞受损，肺 泡出血水肿、炎症细胞浸润，晚期则为肺纤维化过 程，一旦出现肺纤维化，则预后极差ｎ 。研究表明，细 胞因子在肺纤维化的发生发展中起着重要作用 。转 化生长因子一１３１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ一１３１，ＴＧＦ— Ｂ １）具有诱导胶原合成和改变细胞外基质成分等广 泛生物学作用，在各种肺间质纤维化中都具有重要 作用，被认为是纤维化过程中的“开关因子”。目前已 证实，在ＰＱ中毒的早期肺组织中即可检测到ＴＧＦ— Ｂ１高表达［５￣５１。低氧诱导因子一１ ｏ【（ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ—ｌｏｔ，ＨＩＦ—ｌｏｔ）是近年来发现的一种常氧条件下 基本不表达，缺氧时高表达，能够介导哺乳动物细胞 低氧反应的核转录因子。有研究显示，ＨＩＦ—ｌｏｔ通过 多种途径调节人体许多组织的纤维化过程，如肝脏、 肾脏、心脏、肺，甚至脂肪和皮肤组织，抑制ＨＩＦ一１仅 表达能在一定程度上减轻组织器官纤维化程度［７－９］。 茶多酚（ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ＴＰ）是茶叶中多酚类化 合物的总称，黄芩苷（ｂａｉｃａｌｉｎ）是传统中药黄芩ｓｃｕ— ｔｅｌｌａｒｉａｂａｉ ｃａｌｅｎｓｉｓｇｅｏｒｇｉ，ＳＣ）的主要成分，茶多酚及 黄芩苷具有抗氧化性损伤的作用。有文献报道，黄芩 苷及茶多酚对小鼠、大鼠肺纤维化具有一定的干预作 用，能有效减轻博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化 ｌ。 本研究通过腹腔注射染毒建立百草枯中毒大鼠模型 后给予上述两种药物干预，观察其对ＰＱ中毒大鼠血 清及肺组织ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｏｔ表达的影响，报道如 下。 １材料与方法 １．１实验动物ＳＰＦ级健康雄性ＳＤ大鼠９０只，体 质量２００～２５０ｇ，浙江大学医学院附属第一医院实验 动物中心提供，动物合格证ＳＹＸＫ（浙）２０１３—０１８０。 士锋生物科技有限公司；２０％百草枯水剂购自浙江 金华金穗农药有限公司，大鼠ＴＧＦ一１３１及ＨＩＦ—ｌｏｔ两 种ＥＬＩＳＡ试剂盒均来自美国Ｃｕｓａｂｉｏ公司，ＴＧＦ一１３１、 ＨＩＦ—ｌｏｔ抗体、免疫组化试剂盒均购于上海士锋生物 科技有限公司。 １Ｉ３ 实验方法９Ｏ只ＳＤ大鼠随机分为空白对照组 （Ｎ组）、急性ＰＯ中毒组（Ｐ组）、茶多酚干预组（Ｔ 组）、黄芩苷干预组（ｓ组）以及两种药物联合干预组 （Ｌ组），每组１８只。各组再按随机原则分为１、７和 １４天三个亚组，每个亚组６只。Ｐ、Ｔ、Ｓ、Ｌ组大鼠均以 ＰＱ（５０ｍｇ／ｋｇ，生理盐水稀释至１ｍＬ）一次性腹腔注射 染毒。Ｔ、Ｓ、Ｌ组大鼠在百草枯中毒后６ｈ后分别采用 药物灌胃干预，Ｔ组大鼠给予茶多酚２５０ｍｇ／ｋｇ灌胃 干预，每天１次，至处死；Ｓ组大鼠予黄芩苷８０ｍｇ／ｋｇ 灌胃干预，每天１次至处死；Ｌ组大鼠给予茶多酚及 黄芩苷复合制剂灌胃干预，每天１次至处死；Ｎ组和 Ｐ组均给予用等量生理盐水灌胃。实验第１、７、１４天 采用腹腔内注射水合氯醛（１Ｏ％水合氯醛按０．４ｍＬ／ １００ｇ腹腔注射）麻醉后仰卧大鼠，腹主动脉采血，静 置２０ｍｉｎ，３０００ｄｍｉｎ离心５ｍｉｎ后取血清，采用酶联 免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＴＧＦ—Ｂｌ、ＨＩＦ—ｌｔｏ水 平，按说明书规程操作。开胸，完整取出两侧肺组织， 取左肺叶用１０％液固定，以备免疫组化染 色。 １．４大鼠肺组织切片与ＴＧＦ—Ｂ１、ＨＩＦ—ｌｏｔ免疫组化 染色取大鼠肺组织，１０％液固定，梯度酒 精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。将肺组织石蜡块 ３ｕｍ切片依次脱蜡至水，３％Ｈ：０ 阻断２０ｍｉｎ，煮沸 １５ｍｉｎ抗原修复，用１０％正常羊血清室温孵育切片， 封闭。甩掉封闭液，滴加１：１０００稀释的一抗孵育切 片，３７℃孵育ｌｈ。ＰＢＳ洗涤。滴加生物素化山羊抗兔 ＩｇＧ二抗，３７℃孵育２０ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤。滴加ＳＡＢＣ， ３７℃孵育２０ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤ＤＡＢ镜下控制染色，苏木 精复染２ｍｉｎ，乙醇脱水、甲苯透明，中性胶封片，显微 塑 堕 结合杂志２０１４年第２４卷第９期Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＪＩＴＣＷＭ（Ｖｏ１．．２４ Ｎｏ。９ ２０１４） ７５９ 镜下观察组织着色情况。免疫组化研究中同时设置 （Ｐ＜Ｏ．０５），Ｔ、Ｓ、Ｌ组ＨＩＦ—ｌｏｔ水平无明显变化（Ｐ＞ 阴性和阳性对照。每张切片选择５个不同视野采用 ０．０５）；Ｔ、Ｓ、Ｌ组与Ｐ组比较差异无统计学意义（Ｐ＞ ｉｍａｇｅ—ｐｒｏｐｌｕｓ图像分析系统进行定量分析，结果以 ０．０５）。实验第７天，与Ｎ组比较，Ｐ、Ｔ、Ｓ、Ｌ组ＨＩＦ—ｌｏｔ 光密度值（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ，ＯＤ）表示，取其均值进行统 水平显著升高（Ｐ＜０．０５）；Ｔ、Ｓ、Ｌ组较Ｐ组明显降低 计分析。 （Ｐ＜Ｏ．０５）。实验第ｌ４天，与Ｎ组比较，Ｐ、Ｔ组ＨＩＦ一 １．５统计学方法应用ＳＰＳＳ２０．０软件处理数据。实 １ 水平显著升高（Ｐ＜０．０５）；Ｔ、Ｓ、Ｌ组较Ｐ组明显降 验数据用均数±标准差（元±ｓ）表示，采用单因素方差 低（Ｐ＜Ｏ．０５）。见表３。 分析，组间多重比较采用ＬＳＤ检验，以Ｐ＜０．０５为差 表３ 不同时点各组大鼠血清ＨＩＦ一１ 水平比较（ ±ｓ）ｐｇ／ｍＬ 异有统计学意义。 ２结果 ２．１各组大鼠血清ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｏｔ含量比较血 清ＴＧＦ一１３１水平：Ｐ组显著高于Ｎ组（Ｐ＜０．０５）；与Ｐ 组比较，Ｔ、Ｓ、Ｌ组下降明显（Ｐ＜０．０５）。血清ＨＩＦ一１仅 水平：Ｐ、Ｔ组显著高于Ｎ组（Ｐ＜Ｏ．０５）；与Ｐ组比较， Ｔ、Ｓ、Ｌ组下降明显（Ｐ＜０．０５）。见表１。 表１ 各组大鼠血清ＴＧＦ－１３１、ＨＩＦ一１仅含量比较（ ±ｓ）ｐｇ／ｍＬ 注：Ｎ组为空白对照组，Ｐ组为急性ＰＱ中毒组，Ｔ组为茶多酚干预组， Ｓ组为黄芩苷干预组，Ｌ组为茶多酚合黄芩苷干预组。与Ｎ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｐ组比较，ａＰ＜Ｏ．０５ ２．２各组大鼠不同时点血清ＴＧＦ一１３１含量比较实 验第１天，与Ｎ组比较，Ｐ、Ｔ、Ｓ、Ｌ组ＴＧＦ一１３１水平显 著升高（Ｐ＜０．０５），Ｔ、ｓ、Ｌ组与Ｐ组比较差异无统计学 意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。实验第７天，与Ｎ组比较，Ｐ、Ｔ、Ｓ组 ＴＧＦ一１３１水平显著升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｔ、Ｓ、Ｌ组较Ｐ组明 显降低（Ｐ＜０．０５）。实验第１４天，与Ｎ组比较，Ｐ组 ＴＧＦ一１３１水平显著升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｔ、Ｓ、Ｌ组较Ｐ组明 显降低（Ｐ＜０．０５）。见表２。 表２不同时点各组大鼠血清ＴＧＦ一１３１水平比较（元±ｓ）ｐｇ／ｍＬ 注：Ｎ组为空白对照组，Ｐ组为急性ＰＱ中毒组，Ｔ组为茶多酚干预组， Ｓ组为黄芩苷干预组，Ｌ组为茶多酚合黄芩苷干预组。与Ｎ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｐ组比较，ａＰ＜Ｏ．０５ ２．３各组大鼠不同时点血清ＨＩＦ一１ ｏ【含量比较实 验第ｌ天，与Ｎ组比较，Ｐ组ＨＩＦ—ｌ ｏ【水平显著升高 注：Ｎ组为空白对照组，Ｐ组为急性ＰＱ中毒组，Ｔ组为茶多酚干预组， Ｓ组为黄芩苷干预组，Ｌ组为茶多酚合黄芩苷干预组。与Ｎ组比较， Ｐ＜０．０５；与Ｐ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５ ２．４大鼠肺组织ＴＧＦ—Ｂ１蛋白表达免疫组化结果 显示，大鼠ＴＧＦ—Ｂ１蛋白表达在胞浆，表达的细胞有 肺泡巨噬细胞、支气管上皮细胞、血管内皮细胞（见 插页图１）。与Ｎ组比较，Ｐ、Ｔ、Ｓ及Ｌ组ＴＧＦ一１３１表达 在第１、７、１４天均升高，差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５），其中Ｐ组表达量最高。除Ｓ组７天时与Ｐ组 差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）外，其余各组７天和１４ 天时ＴＧＦ—Ｂｌ表达均较Ｐ组降低（Ｐ均＜０．０５）。各药 物干预组各个时间ＴＧＦ一１３１表达差异均无统计学意 义（Ｐ均＞０．０５）。见表４。 表４不同时间点各组大鼠肺组织ＴＧＦ一１３１表达比较（面±ｓ） 注：Ｎ组为空白对照组，Ｐ组为急性ＰＱ中毒组，Ｔ组为茶多酚干预组， Ｓ组为黄芩苷干预组，Ｌ组为茶多酚合黄芩苷干预组。与Ｎ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｐ组比较，ａＰ＜０．０５ ２．５各组大鼠肺组织ＨＩＦ一１ ｏ【表达变化 ＨＩＦ一１ 蛋白阳性表达主要位于肺细小动脉平滑肌细胞，肺 泡上皮细胞及细支气管上皮细胞，胞浆均呈阳性（见 插页图２）。与对照组比较，Ｐ、Ｔ、Ｓ及Ｌ组ＨＩＦ—ｌｏｔ表 达在第１、７、１４天均升高，差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５），其中Ｐ组表达量最高。除Ｓ组７天时与Ｐ组 差异无统计学意义（Ｊｐ＞Ｏ．０５）外，其余各组７、ｌ４天时 ＨＩＦ—ｌｏｔ表达均较Ｐ组降低（Ｐ均＜０．０５）。各药物干预 ７６０ 浙江中西医结合杂志２０１４年第２４卷第９期Ｚｈ￣ｉａｎｇＪＩＴｃｗＭ（Ｖｏ】．２４ Ｎｏ．９ ２０１４） ｔ与缺氧的相关性。组 组各个时间点ＨＩＦ—ｌｏｔ表达差异无统计学意义（Ｐ 基。已有大量研究证实ＨＩＦ—ｌｏ均＞０．０５）。见表５。 表５ 不同时间点各组大鼠肺组织ＨＩＦ一１ｄ表达比较（ ） 织细胞低氧既是百草枯中毒急性肺损伤的主要表现 之一，又是促进肺损伤进一步加重，肺组织纤维化形 成的机制之一。有研究表明，ＨＩＦ—ｌｏｔ通过多种途径 调节人体许多组织的纤维化过程，如肝脏、肾脏、心 脏、肺，甚至脂肪和皮肤组织。抑制ＨＩＦ—ｌｏｔ表达能在 一定程度上减轻组织器官纤维化程度。 茶多酚又称茶鞣质、茶单宁，是从茶叶中提取的 注：Ｎ组为空白对照组，Ｐ组为急性ＰＱ中毒组，Ｔ组为茶多酚干预组， 含有多酚类化合物的混合物，主要包括儿茶素类、黄 Ｓ组为黄芩苷干预组，Ｌ组为茶多酚合黄芩苷干预组。与Ｎ组比较， 段Ｏ．０５；与Ｐ组比较，Ａｐ＜０．０５ ３讨论 自１９６６年Ｂｕｌｌｉｖａｎｔｔ ２】首次报道２例百草枯中毒 死亡病例后，世界各地相继报道百草枯中毒病例。百 草枯属于联吡啶类除草剂，动物实验属中等毒类，人 口服百草枯中毒致死量约为５～１ＯｒａＬ的２０％原液。 ＰＱ中毒后肺组织浓度最高『ｌ３】，引起肺泡出血、水肿， 以及炎细胞浸润，最终导致肺纤维化，严重影响气体 交换，致使缺氧而死亡，死亡率高，且存活者中绝大 多数存在肺纤维化。因此，如能有效地干预及减轻肺 出血、水肿等病理变化，减慢肺纤维化的形成，可以 减少百草枯中毒的病死率。 有关肺纤维化发病机制的研究显示，细胞因子 可通过自分泌或旁分泌方式发挥其生物学作用，并 通过与其靶细胞表面相应受体相互作用，将生物信 号转导至细胞内，启动胞内信号转导级联，胞内 基因表达，从而导致肺纤维 。因此，近年有文献提 出肺纤维化细胞因子网络的概念，产生细胞因子的 细胞有肺巨噬细胞、肺泡Ⅱ型细胞、中性粒细胞、上 皮细胞和毛细血管内皮细胞等。 ＴＧＦ一１３ １被认为是肺纤维化病理过程起重要作 用的细胞因子之一，在肺纤维化发生的细胞因子网 络中占据着重要地位。它作用于多个环节，与多种细 胞因子相互作用，刺激各种细胞外基质的合成和沉 积以及抑制细胞外基质蛋白的降解两个方面，最终 促使肺间质胶原的沉积。动物实验证实，ＴＧＦ一１３１在 二氧化硅、博莱霉素诱导的肺纤维化的发生、发展过 程中发挥重要的作用。 低氧诱导因子１（ＨＩＦ一１）被认为是诱导低氧基 因和修复细胞内氧环境的一核心调节因子，广泛存 在于慢性缺氧细胞中。它是由ＨＩＦ—ｌｏｔ和ＨＩＦ一１１３２ 个亚基组成的异二聚体。其中，ＨＩＦ—ｌｏｔ是ＨＩＦ一１所 特有，是ＨＩＦ一１的调节亚基，又是ＨＩＦ一１的活性亚 酮及黄酮醇类、花白素及花青素类、酚酸及缩酚酸 类。研究［１５】表明，茶多酚具有抗菌、防癌抗癌、降血脂、 保护心脑血管、护肝和抗氧化等作用。黄芩主要含黄 芩苷、黄芩素、汉黄芩素、汉黄芩苷、黄芩新素、Ｂ一谷 甾醇等成分，临床主要用于消炎和抗感染以及抗脂 质过氧化作用［１６Ｊ。研究发现，茶多酚及黄芩苷能有效 减轻博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化，对能否减轻 百草枯所致大鼠肺纤维化少有报道。本研究结果显 示，空白对照组大鼠无明显ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｏｔ表达， 而ＰＱ中毒组大鼠两者表达水平均有显著增高，与文 献报道一致㈣。ＰＱ中毒大鼠用茶多酚及黄芩苷干预 后，血清ＴＧＦ一１３１、ＨＩＦ—ｌｏｔ及肺组织ＴＧＦ—Ｂ１、ＨＩＦ一 １仅表达水平均有显著下降，并且部分药物干预组在 第ｌ４天时与空白对照组间差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）。本研究结果显示，茶多酚及黄芩苷可下调百草 枯中毒大鼠血清及肺组织ＴＧＦ—Ｂ１和ＨＩＦ—ｌｏｔ表达 水平。 参考文献 ［１］ＭｏｒＯｎ ＪＭ，Ｏｒｔｉｚ—Ｏｒｔｉｚ ＭＡ，Ｒｕｉｚ—Ｍｅｓａ ＬＭ，ｅｔ ａ１．Ｎｉｔｒｉｃ ＯＸ— ｉｄｅ ｉｎ ｐａｒａｑｕａｔ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０１０，２４（６）：４０２—４０９． ［２］Ｙａｍａｓｈｉｔａ Ｍ，Ｙａｍａｓｈｉｔａ Ｍ，Ａｎｄｏ Ｙ．Ａ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ—ｕｐ ｏｆ ｌｕｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ ｏｆ ｐａｒａｑｕａｔ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ［Ｊ Ｊ．Ｈｕｍ Ｅｘｐ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０００，１９（２）：９９—１０３． ［３］Ｓｕｎｔｒｅｓ ＺＥ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｎ ｐａｒａｑｕ￣ｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］． Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００２，１８０（１）：６５－７７． ［４］Ｚｈａｉ Ｒ，Ｇｅ Ｘ，Ｌｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍ— ｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｉｆｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｍｎｅｈｏａｌｖｅｄａｒ［ａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ ｉｎ ｂａｇａｓｓｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｉｌｉｃｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｉｎｄ Ｍｅｄ，２００４，４６（４）： ３３８． ［５］Ｍａｉｎｗａｒｉｎｇ Ｇ，Ｌｉｍ ＦＬ，Ａｎｔｒｏｂｕｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅａｄｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｗａｙｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｐａｒａｑｕａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｌｕｎｇ［Ｊ Ｊ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００６，２２５（２－３）：１５７—１７２． ［６］ ｓｈｉｄａ Ｙ，Ｔａｋａｙａｓｕ Ｔ，Ｋｉｍｕｒａ Ａ＇ （下转第７６４页） ７６４ 浙江中西医结合杂志２０１４年第２４卷第９期１２０－ｌ２４． Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＪＩＴｃｗＭ（Ｖ０１．２４ Ｎｏ．９ ２０１４） 人肺巨细胞癌细胞系ＢＥ１（高转移能力亚型）、ＬＨ７ 细胞系中发现ＲｈｏＣ蛋白和ｍＲＮＡ的表达升高，高 ｋａｍｐ Ａ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｃ，Ｓｔｏｌｌ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｒａｓ ａｎｄ ｒｈｅｂ ｓｉｇｎａｌ－ （低转移能力亚型）、人肺腺癌细胞系Ａ５４９、Ａ２肺癌 ［３］Ｅｈｒｉｎｇ ｉｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｓ（Ｂａｓｅ１），ｒ２０１３，５ （２）：６３９—６６１． 转移能力亚型高于低转移能力亚型嘲。我们推测本研 究结果与其他学者研究不一致的原因是ＲｈｏＣ的表 ［４］肖建军，陶敏，周新文．ＲｈｏＧＤＩ蛋白在肺癌组织中的表达 及其与临床病理特征的关系［Ｊ］．中国肿瘤生物治疗杂志， ２０１０，１７（２）：２００—２０４． 达可能与肺癌细胞分型不同有关，其机制有待于进 一步研究。 ［５］Ｘｕ ＸＴ，Ｓｏｎｇ ＱＢ，Ｙａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ 综上所述，Ｒｈｏ家族ＲｈｏＡ和ＲｈｏＢ在肺癌细胞 系及临床肺癌组织中表达升高，提示它们与肺癌细 ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒ０ｅｎｔｅｍｌ０ｇｙ，２０１２，９（１２０）：２５２３—２５２６． 胞的形成和转移密切相关，可能被作为肺癌发展的 ［６］Ｎｅｅｄｈａｍ Ｍ，Ｓｔｏｃｋｌｅｙ ＲＡ．Ａｌｐｈａ １－ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．３： 生物标记物之一；而ＲｈｏＣ的表达可能随肺癌细胞分 Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙｌＪ Ｊ．Ｔｈｏｒａｘ，２０Ｏ４， 型不同而不同。 ５９（５）：４４１—４４５． ［７］陈丹，于壮，潘华政，等．ＲａｌＡ ＲｈｏＣ在非小细胞肺癌组织 参考文献 中的表达及意义［Ｊ］．现代生物医学进展，１２（７）：１２９６— １２９９． ［１］ Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＥＳ，Ｄｕｐｕｙ ＤＥ．Ｌｕｎｇ ＣａｎｃｅｒＡｂｌａｔｉｏｎ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏ— ｇｉｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔ Ｒａｄｉｏｌ，２０１ ３，３０ ［８］韩昱晨，高爽，吴燕妮，等．ＲｈｏＣ、Ｒｈｏ—ＧＤＩｃｔ在肺癌细胞系 （２）：１４１—１５０． 中过表达并与转移相关［Ｊ］．中国组织化学与细胞化学杂 ［２］ Ｐｅｎｄｈａｒｋａｒ Ｄ，Ａｕｓｅｋａｒ ＢＶ，Ｇｕｐｔａ Ｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ 志，２００８，１７（５）：４４９—４５４． ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ—ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ，２０１３，４（２）： 收稿日期：２０１４—０３—１８ 修回日期：２０１４—０５—０５ （上接第７６０页）ａ１．Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ［１２］ Ｂｕｌｌｉｖａｎｔ ＣＭ．Ａｃｃｉｄｅｎｔａｌ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｂｙ ｐａｒａｑｕａｔ：ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇｓ ａｆｔｅｒ ｐａｒａｑｕａｔ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｗｏ ｃａｓｅｓｉｎｍａｎ［Ｊ］．ＢｒＭｅｄ Ｊ，１９６６，ｌ（５４９８）：１２７２—１２７３． ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｌｅｇａｌ Ｍｅｄ，２００６，８（２）：１０２—１０９． ［１３］ 赵波，菅向东，张忠臣，等．百草枯染毒大鼠组织中毒物 １ ７ Ｊ Ｋｉｍｕｒａ Ｋ，１ｗａｎｏ Ｍ，Ｈｉｇｇｉｎｓ ＤＦ，ｅｔ ａ１．Ｓｔａｂｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ 含量与脏器损伤的关系［Ｊ］．中华劳动卫生职业病杂志， ＨＩＦ一１ ａｌｐｈａ ｉｎ ｔｕｂｕｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ２０１０，２８（３）：５６—５８． ｉｆｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｎａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００８，２９５（４）：Ｆ１０２３一 ［１４］ Ｚｈａｉ Ｒ１，Ｇｅ Ｘ，Ｌｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｉｎ— Ｆ１０２９． ｌｆａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ １ ８ Ｊ Ｈａｌｂｅｒｇ Ｎ，Ｋｈａｎ Ｔ，Ｔｒｕｊｉｌｌｏ ＭＥ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｌｆｕｉｄ ｉｎ ｂａｇａｓｓｏｓｉｓ ａｎｄｓｉｌｉｃｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｉｎｄ Ｍｅｄ，２００４，４６ ｆａｃｔｏｒ ｌａｌｐｈａ ｉｎｄｕｃｅｓ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｗｈｉｔｅ （４）：３３８—３４４． ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ１，２００９，２９（１６）：４６７—４４８３． ［１５］ Ｈｉｇｄｏｎ ＪＶ，Ｆｒｅｉ Ｂ．Ｔｅａ ｃａｔｅｃｈｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ：ｈｅａｌｔｈ １ ９ Ｊ Ｈｏｎｇ ＫＨ，Ｙｏｏ ＳＡ，Ｋａｎｇ ＳＳ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｘｐｒｅｓ－ ｅｆｆｅｃｔｓ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓｌＪ Ｊ．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ ｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｓｃｌｅｒｏｄｅｎｎａ ｓｋｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ Ｎｕｔｒ。２００３，４３（１）：８９—１４３． ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６，１４６（２）：３６２． ［１６］ 张建春，张华．黄芩苷的研究近况［Ｊ］Ｉ时珍国医国药，２００５， １ １Ｏ ｊ Ｓｒｉｒａｍ Ｎ，Ｋａｌａｙａｒａｓａｎ Ｓ，Ｓｕｄｈａｎｄｉｒａｎ Ｇ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ １６（３）：２４７—２４９． ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｓｙｓｔｅｍ ｂｙ ｅｐｉｇａｌ１０ｃａｔｅｃｈｉｎ～３－ｇａｌｌａｔｅ ［１７］ 杭瑛，钱洁，朱长清，等．百草枯中毒小鼠肺组织转化生 ｄｕｒｉｎｇ ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ 长因子Ｂ和缺氧诱导因子１ 的表达［Ｊ］．上海交通大学 ｌＪｊ．Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ，２００８，３１（７）：１３０６—１３１１． 学报（医学版），２０１２，３２（１２）：１５９４—１５９９． 【１１ Ｊ Ｊｉａ Ｈ，Ｃｈｅｎ ＸＬ，Ｃｈｅｎ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｂａｉｃａｌｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ ｕｐ— 收稿日期：２０１４—０３—１２ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｆｉｂｒｏｔｉｃ 修回日期：２０１４—０４—２８ ｌｕｎｇｓ ｏｆ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｓｈｅｎｇ Ｌｉ Ｘｕｅ Ｂａｏ，２０１０，６２（６）：５３５—５４０．
