氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜动物模型小鼠的干预作用

[摘要] 目的 探讨氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜（itp）动物模型小鼠血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。 方法 通过获取balb/c 小鼠血小板抗体，接种到豚鼠身上，获取豚鼠抗小鼠血小板抗体（aps）。将aps腹腔注射balb/c 小鼠建立免疫性血小板减少性紫癜动物模型，使用氨磷汀腹腔注射进行治疗，观察氨磷汀对模型小鼠的血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。 结果 氨磷汀给药后均使itp模型小鼠血小板计数上升、脾脏系数减少、骨髓成熟巨核细胞增多，与模型组比较差异有统计学意义（p1.3 豚鼠抗血小板抗血清的制备

参考文献的方法[6-7]，取健康balb/c小鼠，摘眼球取血，静置半个小时，800 rmp/min离心10 min，取上层血清1500 rmp/min离心15 min，取上层血清900 rmp/min离心10 min，取上层血清3000 rmp/min离心10 min，弃去血清，得底部沉淀血小板，加入1%草酸氨1 ml，静置5 min，3000 rmp/min离心10 min，弃去上层液体，底部血小板用生理盐水洗涤3次，用生理盐水稀释到浓度为1～2×109/l，分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按1∶1混合成弗氏完全佐剂血小板抗原混合物与不弗氏完全佐剂血小板抗原混合物，备用；取健康豚鼠8只，于第1周注射弗氏完全佐剂血小板抗原混合物于其四肢、腹股沟、背部、皮下，每处注射100μl，于第2、3、4周注射同剂量的不弗氏完全佐剂血小板抗原混合物。第4周末用20%乌拉坦2 ml腹腔注射麻醉豚鼠，心脏取血。1500

rmp/min离心10 min，取上层血清，余下全血继续3000 rmp/min离心10 min。合并2次所得血清，得豚鼠抗小鼠血小板血清aps，-20℃保存，备用。自制直径9 cm琼脂糖平板，用打孔器打成梅花形孔，中间孔滴加血小板悬液（500×109/l），周围孔加1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶不同效价的豚鼠抗小鼠血小板血清。37℃温箱孵育24 h观察沉淀弧，检测抗血清效价。 1.4 模型的制备及分组给药[8-9]

取60只雌雄各半的健康balb/c小鼠，随机分为5组，每组12只，分别为氨磷汀高剂量组、低剂量组、模型组、正常组和阳性对照组。取出-20℃保存aps，于56℃水浴30 min灭活补体，用生理盐水稀释到1∶4的效价，小鼠进行腹腔注射。于0、2、4、6、8、10 d按照100μg/20 g小鼠腹腔注入稀释的抗血清，每2天重复注射1次，以维持血小板的持续降低。

从第1次注射aps后，以120 mg/kg剂量腹腔注射作为高剂量组，以60 mg/kg剂量腹腔注射作为低剂量组，每日1次，连续给药10 d，强的松龙组，以2.25 mg/kg剂量腹腔注射作为阳性对照组剂量组，模型组及空白对照组给予生理盐水。

第10天给药后2 h，摘眼球取血，检测血小板计数；解剖取出脾脏，称重，计算脾脏系数；剥离股骨，取出骨髓涂片，瑞士染色法，染色，计算巨核细胞的分类数。 1.5 统计学处理

应用spss15.0统计软件进行统计分析，计量资料用（）的形式

表示，采用t检验，p[4] 范辉，朱宏丽，李素霞，等.氨磷汀治疗17例特发性血小板减少性紫癜[j].中国实验血液学杂志，2008，16（1）：192-196.

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（收稿日期：2013-05-09）