细胞周期的流式检测方法

细胞周期（cell cycle ）是指细胞从一次完成开始到下一次结束所经历的全过程， 分为 G0/G1 期、S 期、G2/M 期。在科研实践中，很多实验具有对细胞群体的周期分布进行 检测的需求。细胞群体周期测定的方法有很多种，最常用的是 行染色，然后通过流式细胞仪检测

因此，下面笔者主要通过 一、PI 染色步骤概略

1、单细胞悬液离心， 1500rpm , 5min ，弃上清。 2、PBS 1ml 离心，弃上清。

3、70%酒精 2ml，4℃，30min，离心，弃上清液。 4、PBS 1ml 离心，弃上清。

5、RNase A 的 PBS 溶液 (20ug/ml) ，500ul，37℃，30min，离心弃上清。 6、PBS 1ml 离心，弃上清。

7、PI 的 PBS 溶液(50ug/ml) ，500ul，室温避光孵育 30min。

8、吹打混匀， 300 目筛网过滤至流式管中， 4℃保存，待测。 二、Calibur 仪器设置及数据收集

1、依次打开 Calibur 机器电源、电脑开关和 CellQuest Pro 软件，按快捷键 Command+B 连机， 按快捷键 Command+1 、2、3、4 调出 Detectors/Amps 面板、 Threshold 面板、 Compensation 面板和 Status面板，软件的操作界面如图

1 所示。

PI（碘化丙啶）渗入 DNA 进

PI 从而测定细胞群体的周期分布。

BD（Becton＆Dickinson ）公司生产的 BD FACSCalibur 流式

细胞仪测定 PI 标记的细胞群体为例，对细胞周期的流式检测方法进行阐述。

图 1. Cell Quest Pro 软件操作界面

2、建立实验模板，包括 FSC/SSC 散点图、 FL2-W/FL2-A 散点图和 FL2-A 直方图。因为 PI 在 Calibur 上是由 488nm 的激光器激发， 530/30 滤光片收集信号， 所以选择 FL2 通道进行检 测。细胞周期是 2N 和 4N 的循环，所以 FL2 通道的 Mode 参数应设置为 Lin 模式，同时阈 值（Threshold）的 Primary Param 参数设置为 FL2-H ，Four Color DDM Param 参数设置为 FL2，

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如图 2、图 3 所示。

图 2. Detectors/Amps 面板 图 3. Threshold 面板

4、图 5 所示。

3、设置细胞的收集数目，数据保存的路径和名称，如图

图 4. Acquisition ＆Storage面板

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图 5. Acquisition 面板

4、在图 6 所示的操作面板中， 勾选 Setup 选项， 点击 Acquire 按钮进行数据收集并调节 通道的电压值使得周期图位于

FL2 直方图中合适的位置。调好电压后，将

点击 Acquire 按钮收集数据。数据以 .FCS 格式保存在之前预设好的文件夹中。

FL2

Setup 选项勾掉，

图 6. Acquisition Control 面板 三、细胞周期数据的分析 流式数据分析软件有很多种，

比如 Cell Quest、BD FCAS Diva 、FlowJo 等等。 但对于细胞周

7 所示。

期数据的分析，统一的分析步骤如下： 1、建立 FSC/SSC 散点图，圈定细胞群，如图

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图 7. FSC/SSC 散点图

2、建立 FL2-W/FL2-A 散点图，去除粘连细胞，如图

8 所示。

图 8. FL2-W/FL2-A 散点图

3、建立 FL2-A 直方图分析细胞周期，如图图 9. FL2-A 直方图

9 所示。

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